基于LC-MS/MS检测人体血浆中非洛地平的方法建立及药代动力学研究文献综述

1. 课题背景

高血压是当今世界最常见的心血管疾病之一，钙离子拮抗剂（calcium channel blocker CCB）是我国高血压患者的基础降压药物，也是美国高血压指南及欧洲高血压指南中推荐的具有最广泛联合应用的药物。钙离子拮抗剂有多种，分为选择性和非选择性两大类，选择性钙离子拮抗剂又可分为三类：苯并硫氮杂卓类，二氢吡啶类和苯基烷基胺类。

非洛地平，4-（2,3-二氯苯基）-1,4-二氢-2,6-二甲基-3,5-吡啶二羧基乙基甲基酯（CAS＃72509-76-3）为二氢吡啶类钙离子拮抗剂，可与尼群地平和/或其他钙离子拮抗剂可逆性竞争二氢吡啶结合位点。药理作用为抑制小动脉平滑肌细胞钙离子的内流，选择性扩张小动脉，对静脉无此作用，不引起体位性低血压，对心肌亦无明显抑制作用。除此之外，非洛地平在降低肾血管阻力的同时，不影响肾小球滤过率和肌酐清除率，肾血流量无变化甚至稍有增加，有促进尿钠排泄和利尿作用。

文献报道非洛地平的不良反应有：剥脱性皮炎、水肿、低钾血症、尿频尿急、男性乳腺增生、全身肌痛、髋关节痛、牙龈增生等。非洛地平属于剂量依赖型降压药，因此应当规范药物使用，注意特殊人群的用药，根据不同个体的自身情况（年龄、体重、过敏史等）适当地调整给药剂量，制定个体化用药方案，实现合理化用药。

血药浓度测定可以为临床药效的预测以及不良反应评价提供参考。研究非洛地平血药浓度测定及其药代动力学对于指导临床用药有十分重要的意义。关于非洛地平含量测定方法，有文献采用GC法和HPLC法测定，但均存在灵敏度低、耗时长等不足。因此本课题在相关文献的基础上，旨在建立一种新的LC-MS/MS方法，能较为快速、灵敏地测定人体血浆中非洛地平的浓度，根据浓度可得出相应的药代动力学参数。建立可行的分析、检测手段与合理的人体药动学研究方法，对临床试验工作有一定的指导意义。

1. 要解决的问题

建立准确、快速、灵敏的LC-MS/MS方法，测定人血浆中的非洛地平的浓度，应用于合理评价非洛地平在人体内的药代动力学特征，为临床合理用药提供指导。

1. 可行性分析

随着液相色谱质谱联用技术（LC-MS/MS）的发展，质谱作为常用的检测手段逐渐应用到不同的领域。液相色谱质谱联用技术以其灵敏度高、专属性好、分析时间短和样品处理简单等特点，已成为研究药物代谢产物的首选方法之一。目前，三重四极杆质谱仪（QQQ）及三重四级杆线性离子阱质谱仪（QTRAP）主要应用于定量分析，比如药代动力学、代谢稳定性、药物相互作用等研究领域。高分辨质谱仪（HRMS）则主要应用于定性分析，比如药物代谢、中药复杂成分鉴定、代谢组学和蛋白组学等研究领域。随着质谱技术包括离子源、质量分析器的快速发展，应运而生了多种针对不同研究领域的分析方法或数据处理方法，比如适用于定量分析的多反应监测模式（MRM）,适用于定性分析的数据依赖性采集（Data-dependent acquisition）或信息关联采集（Information-dependent acquisition）功能以及多种数据后处理方法（如中性丢失过滤NLF、子离子过滤PIF、同位素过滤IPF、质量亏损过滤MDF）。目前，在药物的代谢产物鉴定研究中，HRMS和QTRAP是常用的分析仪器，其中以HRMS为主。HRMS在代谢物鉴定中具有突出的优点，扫描范围宽无需对代谢途径进行预测，可提供精确质量数适合于代谢产物的结构鉴定。然而，由于HRMS的灵敏度低，可能难以实现对复杂基质（比如血浆，尿液或粪便）中微量代谢产物（如反应性代谢物）进行结构鉴定。QTRAP质谱仪不仅具有灵敏度高的MRM扫描模式，也具有扫描范围宽的MIM扫描模式，因而也广泛应用于药物代谢研究。

药物代谢（也称生物转化）是指药物进入人或动物体内后，在体液或代谢酶的作用下发生氧化、还原、水解、结合等一系列生物化学反应生成极性更大的代谢产物（其中甲基化或乙酰化生成极性更小的代谢产物）的过程。在过去的几十年里，药物代谢研究在制药行业越来越受到人们的重视，从主要集中在物质平衡，代谢及消除等方面的研究，到贯穿药物研发各个阶段，包括先导化合物的优化、药物的ADME过程的分析、毒性代谢物或反应性代谢物的发现以及与药代或药效之间的关系等，这一转变极大地推动了应用于代谢研究的分析技术的发展。药物代谢研究涉及的生物样品（如血浆、尿液、粪便、胆汁及其他生物组织）通常含有大量的蛋白、磷脂及其他内源性的成分，往往容易对代谢产物的检测造成一定的干扰。随着色谱和质谱技术的发展，LC-MS/MS技术己经成为药物代谢研究的主要工具。

通过LC-MS/MS可以保证足够的灵敏度，为阐述非洛地平的体内药动学行为奠定了基础。分析时间短尽可能地避免了样本在放置过程中的降解，可以进行高通量的样本测试。然而由于生物样品存在取样量少、药物浓度低、内源性物质多且复杂及个体差异大等多种因素影响测定结果，所以必须根据待测物的结构、生物介质和预期的浓度范围，建立适宜的生物样品分析方法并对方法进行确证。

1. 研究方法和内容

1.查阅文献，熟悉非洛地平的理化性质及相关测定分析方法

2.初步对非洛地平的标准溶液进行LC-MS/MS检测