海马脑片制备条件对神经元膜被动电学特性的影响文献综述

1. 文献综述（或调研报告）：

膜片钳记录哺乳动物中枢神经系统的神经元使用的薄切片制剂

摘要：（1）描述了一种制剂，其允许在哺乳动物中枢神经系统（CNS）神经元上原位进行膜片钳记录。（2）使用振动组织切片机切割薄片，用生理盐水局部清洁细胞胞体释放细胞膜，允许在膜和贴片移液管之间形成高阻力密封。 （3）膜片钳技术的各种配置用于证明膜电位，全细胞电流和来自神经元和孤立斑块的单通道电流的记录。（4）薄片清洁和膜片钳技术被证明适用于脊髓和几乎任何脑区和各种物种。也适用于从新生儿到出生后各年龄的动物。

介绍

膜片钳技术提高了膜电流记录的分辨率。它既可以通过单个通道观察电流，也可以通过小细胞观察全细胞记录（Hamill等，1981）。因为该技术要求细胞膜可直接接近记录移液管，所以它主要局限于通过酶或机械处理与其天然环境断开的细胞，限制了膜片钳技术的适用性，特别是限制记录在调节介导中枢神经系统（CNS）突触传递的通道。随后一些实验室成功地在切片组织制剂中制作膜片钳记录。 Barnes和Werblin（1986）记录了老虎蝾螈视网膜切片中无长突细胞的全细胞电流。在哺乳动物组织的切片中，膜片钳技术的使用基本限于海马体的制备。一开始，通过在蛋白水解酶中孵育来切割切片（Gray和Johnston 1985）。随后Edward FA团队描述了不使用酶处理的从突触连接的哺乳动物神经元制作膜片钳记录的程序，适用于不同发育阶段的CNS的许多不同区域。通过使用薄切片，可以在视觉上鉴定个体中枢神经元（Yamamoto 1975; Takahashi 1978; Llinas and Sugimori 1980）。仅使用生理盐水，这些神经元可以部分暴露，允许紧密密封膜片钳记录。描述了从脊髓和脑中暴露薄片中的单个神经元的方法，并且说明了膜片钳技术的不同构型对这些制剂的适用性。

1.用于膜片钳测量的薄片的制备

1.1脑或脊髓组织的切片

用于薄切片的脑或脊髓组织的切片通常类似于用振动切片机切割常规脑切片（综述参见Alger等人，1984）。 具体步骤如下。

1.2用于切片的组织的制备

将动物断头并除去脑或脊髓的适当部分。1-1.5分钟内完成。保持组织冷敷尤为重要。这可能最大限度地减少了缺氧造成的损害，并改善切片组织的质地。为此全程操作应尽可能将组织浸没在冰冷的生理盐水中。如果对于大型动物（例如超过两个月大的大鼠）需要更多的时间来移除大脑，则一旦颅骨打开，也应该将冰冷的生理盐水倒在大脑上。去除后，在切片前将脑在0-4℃温育至少3分钟。这样已分割的大鼠脑可以储存长达一个小时而没有明显的恶化。

1.3切片