菊花CmERF3基因在拟南芥中的遗传转化分析开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1.课题的意义

菊花(chrysanthemum morifoliumtzvel)是世界四大切花之一，具有良好的观赏性状和较高的经济价值,在花卉产业中占据着重要的位置。多数菊花品种属典型的短日照植物，花期相对集中。目前主要通过光温调控以实现周年生产供应，能耗成本高昂。作为观花植物,研究花期调控的分子机制,进行花期改良，推动菊花周年生产供应，以适应市场的需求,具有重要意义。

植物花芽分化是植物从营养生长向生殖生长转变的重要阶段，由内部发育和环境因子共同决定，主要受光周期途径、春化作用、自主途径、温度途径、赤霉素途径以及年龄途径等6条途径调控。乙烯作为一种小分子植物激素，在植物开花中被证明具有重要作用，如诱导花芽的形成和开花，影响花性别的表达。盆栽水仙^[1]用乙烯利浇灌土壤, 连续两次可促使提前开花；对堆放水仙鳞茎的介质撒乙烯利, 点燃介质可使其花芽分化增加, 产生更多花枝^[1]。而cmerf3（ethylene responsive factors）作为乙烯响应因子，对植物生长发育发挥着重要的调节作用。通过进行菊花cmerf3基因在拟南芥中的遗传转化分析，初步探究菊花乙烯响应因子cmerf3参与花期调控的机理。

2. 研究的基本内容和问题

1.研究目标

①采用农杆菌介导的花粉管侵染法将超表达载体pdest-srdx-35aa-cmerf3异源基因转入拟南芥，获得相应的转基因株系。

②通过观察转基因株系表型及相关基因的定量分析，探究cmerf3对拟南芥花期调控的作用及可能的调控机制。

3. 研究的方法与方案

1.研究方法

采用花粉管侵染法遗传转化拟南芥：侵染后得到t1代种子播在1/2 ms 25 mg/l hyg筛选培养基上，以获得阳性苗。提取筛选到的株系的dna，用基因特异引物cmerf3-f/r在分子水平上确定 cmerf3基因是否转入。选择鉴定为阳性的株系继续种植到t3代，以获得纯合株系并观察表型，再对其进行半定量分析及拟南芥开花基因的定量分析。

2.技术路线

4. 研究创新点

5.特色或创新之处

首次探究菊花CmERF3调控拟南芥花期的分子机理。

5. 研究计划与进展

1.研究计划

2019年5月-8月，自行查阅相关文献，明确研究思路，有疑问处与老师积极沟通，并积极请教老师和学姐应具备的知识储备和相关材料，同时开始侵染野生型拟南芥并获得t1代拟南芥种子。

2019年9月-2020年1月，用抗性培养基筛选获得转基因植株并经过连续两次收种播种获得纯合转基因植株，观察表型，取样并做该基因的半定量及拟南芥一些开花基因的定量。