1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

一、课题的意义与国内外研究进展

1、柿的种类与价值

柿是柿科(ebenaceae)柿属(diospyros l.)植物，落叶乔木，生长于热带和温带。柿子分涩柿和甜柿两种，涩柿中具有可溶性单宁，需要经过后熟方可食用，例如大磨盘柿、托柿、桔蜜柿、新安牛心柿等；甜柿则不需要经过后熟可以直接食用，如富有柿、阳丰柿等。

2. 研究的基本内容和问题

一、研究目标和内容

现已有研究表明有些宿存果蒂对果实的生长发育具有重要的影响，例如梨、番茄、柿等。但近几年相关甜柿研究较少，且一般的研究都是通过将整个柿蒂去除对果实的影响。柿共有4片萼片，本实验通过改进，选取品质上佳的“阳丰”甜柿品种，在柿果实发育早期对其进行不同片数的萼片去除处理，通过对处理后的相关指标测定，探究不同萼片数对果实生长发育及果实品质的影响。同时利用不同浓度的ga₃和aba激素涂抹于萼片伤口处，通过对落果情况、生长、品质指标的测定对比，探究激素对去蒂柿果实的影响。

二、拟解决关键问题

1、柿果早期生长发育时间的确定

3. 研究的方法与方案

一、研究方法、技术路线

1、实验地点

实验于2019年6月-2019年11月在南京农业大学生科楼果树实验室和江苏省南京市六合区天享甜柿园进行。六合位于江苏省北部，为亚热带季风气候，气候温和，四季分明，雨水适宜，适宜甜柿生长。天享甜柿园园区中种植了4年生品质较好的“阳丰”甜柿，现已进入盛果期。

2、研究方法

2.1生长发育期处理

2.1.1生长期去萼处理

本实验选取柿果生长曲线第Ⅰ期果实迅速生长期（6月23日）进行处理。不同的柿蒂萼片数处理：去除1、2、3、4片柿蒂萼片，并设置对照。共4个处理，每个处理一棵树，每棵树上设置对照，重复3次，共需要12棵树。

柿果成熟期（11月15日）采摘对照组和处理组成熟柿果。

2.1.2生长期去萼后激素处理

激素种类与浓度为GA₃：100ppm；ABA：100ppm。

将上述2.1.1中柿果处理后的每棵树随机选取6个果，每个激素处理3个果。于萼片处涂抹激素，贴上标签。

柿果成熟期，将贴上标签的果采下，进行相关数据测量。

三、实验方案

1. 柿果横纵径

   摘取的柿子样品用游标卡尺（0.01mm）测量出果实的纵径（L）、横径（D）。

2. 柿果重量

   摘取的柿子样品重量用电子天平称量，记录。

3. 柿果还原糖

   PAL-1式手持糖度计。

4. 柿果可溶性糖

4.1材料 选择处理后采摘的柿果，每个处理3个果

4.2仪器设备 酶标仪，恒温水浴锅，试管，5 ml和1 ml刻度吸管，5 ml和1 ml的移液枪，记号笔，纸

4.3试剂

1. 蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1g，溶于50 ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数周，如有结晶析出，可微热溶解。

   （2）100 ug/L蔗糖溶液： 1蔗糖标准液：精确称取蔗糖1.000 g，加入少量水溶解，移入100 ml容量瓶，加0.5 ml浓硫酸，定容至刻度线。 100 ug/L蔗糖溶液的配制：用移液枪精确吸取1蔗糖标准液1 ml，加入到100 ml容量瓶 ，加蒸馏水定容。

   （3）浓硫酸（比重1.84）

   4.4 实验步骤

   4.4.1标准曲线的制作

   按表1加入标准的蔗糖溶液，然后按顺序向试管中加入0.5 ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5 ml浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管准确保温1min取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630nm波长下测其光密度，以光密度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。

表一：蔗糖标准曲线

4.4.2可溶性糖的提取

将样品取出，称取0.20－0.30g，记录重量，使用镊子将样品夹入刻度试管中，加入10mL 蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min（提取2次），提取液过滤入25ml容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。

4.4.3显色测定

吸取样品提取液0.5 ml于20 ml刻度试管中（重复2次），加蒸馏水1.5 ml，然后加入0.5 ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5 ml浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管准确保温1min取出后自然冷却至室温，以空白作参比（切勿忘掉对照）。在630nm波长下测其光密度，测定样品的光密度。

4.4.4计算

C *V总 *N

样品含糖量（） *100

W *V测 *10^6

C--------------标准曲线对应糖含量

V总-----------提取液总体积ml，此处为25ml

N--------------稀释倍数，此处为25/0.5

W-------------样品重量

V测-----------测定时取用体积，此处为0.2ml5、柿果可滴定酸

1. 5.1材料 选择处理后采摘的柿果，每个处理3个果

   5.2仪器设备 磨样机、电子天平（感量0.01）、电热恒温水浴锅、试管、25mL烧杯、50ml离心管、50mL碱式滴定管等玻璃仪器

   5.3试剂 0.01mol/L氢氧化钠标准溶液、酚酞指示剂及10g/L的95 乙醇溶液等。

   5.4 实验步骤

5.4.1 样品处理

去皮，准确称取 10g 置于磨样机中，加入等量的水10ml；

用90mL 蒸馏水洗入烧杯（纸杯）后，用移液管吸取10ml加入25ml烧杯（纸杯）中，加蒸馏水10ml，盖上保鲜膜，置于75℃水浴上加热30min，期间不时用玻棒搅拌，冷却；

5.4.2 滴定

加酚酞指示剂 3～5 滴，用0.01或0.1mol/L NaOH 溶液滴定至淡红色，30s内不退色为终， 先用0.1NaOH，若滴定用量少则换为0.01

5.4.3 计算

通式为：含酸量 C*V1*V2*f / （V3*M）×100

C：NaOH浓度；V1：滴定所用氢氧化钠体积；V2：提取液的体积，100ml；f：苹果酸折算系数，0.067，0.067g/m mol；V3：被滴定的提取液体积，10ml；M ：提取样品的质量。

四、研究可行性分析

“阳丰”甜柿在南京六合区适宜种植，学校拥有丰富的实验仪器，为实验提供了基础。已有研究表明柿蒂对果实的发育有重要作用。且柿蒂中还含有很多活性物质，GA₃是植物中重要的生长发育类激素，同时柿蒂也是果实生长成熟过程中乙烯、ABA等激素的起始合成位置。所以本实验的研究具有一定的意义。

4. 研究创新点

1. 因柿蒂有4个萼片，本实验采取不同萼片数的去除方式，进一步研究不同萼片数量对柿果发育的影响。

2. 激素在植物生长发育中也有重要作用，本实验在去蒂后利用激素处理来探究萼片中的激素信号对果实发育影响。

5. 研究计划与进展

1. 去除不同萼片数对“阳丰”甜柿生长发育及品质有不同影响。

2. 用激素处理后的柿果与未处理的有一定差异，并且对柿果的生长发育起一定的促进作用。