青种枇杷花药离体培养的研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

枇杷（eriobotryajaponicalindl.）别名卢橘，是蔷薇科(rosaceae)枇杷属（eriobotrya）植物。种质资源丰富，是原产我国的特色树种，本属约有30种，大多分布在亚洲南部，其中原产中国的有15种，作为人工栽培的只有普通枇杷一种，其余的可作为砧木或育种材料。

枇杷是我国亚热带地区珍稀特产水果，果实色泽美观，果肉柔软多汁、鲜美可口。枇杷果实不仅味道好，而且营养价值也很高。据分析，每公斤枇杷果肉中含有蛋白质2.6克，糖类46克，钙146克，磷238，维生素c21克，同时还含有丰富的钾、镁、铁等各种微量元素，其中胡萝卜素的含量特别丰富，在所有水果中高居第三位，枇杷还能刺激消化腺分泌，增进食欲，帮助消化，有止渴、清凉、解暑之功效。同时对保护视力，保护皮肤健康润泽，促进儿童的身体发育都有着十分重要的作用。

枇杷分为白沙和红沙两大类。白沙味甜似蜜，香味浓郁优于红沙。白沙是用来概括白肉和黄肉系统的枇杷品种，青种枇杷是介于白沙枇杷和红沙枇杷之间的优良枇杷品种[1]，是苏州西山的传统名特优果品，栽培历史悠久，始载于唐朝晚期，素有洞庭山琵琶为天下之最之说。青种枇杷原由野生枇杷变异而来，清末由西山秉场村果农发现并推广繁殖至今。果实成熟时底部仍呈青绿色，是该品种最易辨认的特征，青种之名亦由此来。青种枇杷颜色为淡橙黄，平均单果为33.2克，最大的达50克。果肉为淡黄，含水分为90%，为枇杷品种之首。

2. 研究的基本内容和问题

1、研究目标：

本项目主要是以江苏苏州西山的青种枇杷花药为外植体进行枇杷无菌苗培养的研究，目的在于：摸索出一套适合青种枇杷快速繁殖的方法。

2、研究内容：

3. 研究的方法与方案

1、研究方法：

（1）愈伤组织或胚状体诱导培养 采盛花期的花蕾带回实验室，先置放在4℃冰箱中保存0～7d后拿出花蕾，在流水下冲洗30min左右后带入无菌室。在超净工作台上，用无菌水冲洗1次，用75%乙醇浸泡30s之后，再用无菌水冲洗2次，再用0.1%升汞浸泡8min，最后用无菌水冲洗5～6次。消毒之后用无菌吸水纸吸干花蕾表面的水后，立即小心剥取花药作为外植体，接种在诱导愈伤组织的培养基上，每个培养皿接种15～20粒花药。以ms为基本培养基，附加琼脂6g/l，蔗糖25～35g.l-1，ph值调至5.8，试验不同浓度的ba、iba和2,4-d对花药的影响。接种后先置于黑暗中培养2个星期左右后，再置于光照（1500lx，10-12h）下培养，培养温度在（25 1）℃，湿度80%。

（2）再分化培养 将诱导出的黄色或绿色愈伤组织转移到新的培养基中培养，以ms为基本培养基，附加琼脂7g.l-1，蔗糖30 g.l-1，ph值调至5.8，试验以下四种组合：6-ba取1.0 mg.l-1、3.0mg.l-1、5.0mg.l-1、7.0mg.l-1，四种情况下naa都取0.5mg.l-1。

（3）生根培养 把健壮的幼苗移到生根培养基中培养，以1/2ms为基本培 养基，附加琼脂6 g/l，蔗糖20 g.l-1，ph值调至5.6。接种后置于光照下培养，光照强度1500 lx，光照时间每日10～12 h，培养温度在25（1）℃，相对湿度为80%。了解不同质量分数的iba和naa对幼苗生根的影响。

4. 研究创新点

本项目是以青种枇杷花药为材料，研究花药离体培养，这在国内尚未见报道。

5. 研究计划与进展

1、研究计划

2013年11月-2014年1月，研究不同时间的低温预处理，不同的蔗糖浓度，不同的激素配比对花药诱导愈伤组织或胚状体的影响；

2014年1月-4月，研究不同激素配比对愈伤组织或胚状体再分化的影响，筛选合适的再分化培养基；