萝卜游离小孢子培养体系关键因素研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

萝卜(raphanussativusl.)是十字花科萝卜属一、二年生草本植物，营养价值丰富，药用价值高[1]。萝卜是典型的十字花科雌雄同花的异花授粉作物，遗传变异大，杂种优势十分明显，多代自交易出现黄化现象,经济性状退化严重。由于自交不亲和及其他原因，在现行萝卜育种中很难获得纯合植株,单倍体的产生似乎是获得纯合系的唯一途径。

游离小孢子培养是产生单倍体及纯合系（双单倍体）的最有效的方法途径之一。小孢子是高等植物生活史中雄配子体发育过程中短暂而重要的阶段,是减数分裂后四分体释放出的单核细胞[2]。游离小孢子培养是指不经过任何形式的花药预培养,直接从花蕾或花药中获得游离的﹑新鲜的小孢子群体，在单细胞的水平上获得纯系的培养方法。在蔬菜作物遗传育种中,利用单倍体加倍可以在一个世代就获得性状稳定的纯合重组体,大大缩短亲本纯合的时间,加快育种进程,提高所需基因组合的选择效率，因此被广泛采用。

自1989年,lichter首次报道brassicanapus(甘蓝型油菜)小孢子培养形成植株以来[3],有关此方面的研究就在蔬菜作物中广泛展开，研究内容主要集中在以下几个方面：影响游离小孢子胚胎发生的因素[4-6]；小孢子胚状体再生植株的诱导研究[7-9]；小孢子再生株的倍性鉴定﹑加倍及dh群体的应用[10]等。

2. 研究的基本内容和问题

1.1研究目标

1.1.1提高萝卜小孢子的体胚诱导率与单倍体植株诱导再生频率；

1.1.2获得综合性状优良的亲本材料，缩短育种年限。

3. 研究的方法与方案

2.1研究方法、实验方案：

2.1.1培养基的配制

配制b5提取缓冲液和nln-13液体培养基。

4. 研究创新点

小孢子培养在育种工作中至关重要，然而目前萝卜小孢子培养出胚率极低，前人在此方面所做的研究不是很多。本研究从基因型筛选、培养基蔗糖、预处理等方面入手，以提高萝卜小孢子培养过程中体胚诱导率。

5. 研究计划与进展

2013.3-2013.5与教师交流，查阅相关资料，细化试验计划；

2013.6-2013.11学习小孢子实验技术，通过实验确定适宜培养的花蕾的大

小和瓣药比；

2014.12-2014.1整理试验结果，进行调整试验；