胡萝卜抗坏血酸过氧化物酶DcAPX基因的克隆与表达分析开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

胡萝卜（daucus carota l.），伞形科二年生作物，也是一种世界性栽培蔬菜，以其丰富的营养品质广受人们喜爱。

胡萝卜生长发育期间，经常会受到高温、低温、干旱、盐害等不利环境的侵袭，最终影响产量和品质。

研究胡萝卜apx基因在抵御逆境胁迫过程中的作用对于揭示和发掘胡萝卜抗逆能力、提高其产量和品质具有重要意义。

2. 研究的基本内容和问题

1、研究目标：(1)明确胡萝卜APX基因在抵御逆境胁迫过程中的作用； (2)进一步研究伞形科植物APX基因2、研究内容：(1)从胡萝卜中克隆获得APX基因; (2)利用实时定量PCR技术对APX基因逆境条件下的表达进行研究; (3) 明确胡萝卜APX基因在抵御逆境胁迫过程中的作用; (4)进一步研究伞形科植物APX基因在抗逆过程中的作用3、拟解决的关键问题：实验材料均是本实验室种植的材料，其品种性和地域性代表不足

3. 研究的方法与方案

1、研究方法：从胡萝卜黑田五寸品种中克隆获得胡萝卜apx基因，并对该基因进行较为详尽的序列分析，利用实时定量pcr技术对其逆境条件下的表达进行了研究，最终明确胡萝卜apx基因在抵御逆境胁迫过程中的作用。

2、技术路线： 3、实验方案：（1）rna的提取及cdna的合成：采用rna simple total rna kit（tiangen公司）提取总rna，利用prime script rt reagent kit（takara公司）将提取的总rna反转录成cdna。

（2）胡萝卜dcapx基因的克隆：以黑田五寸cdna为模板进行扩增，pcr反应程序为：94 ℃预变性5 min；94 ℃变性30 s，54 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min，共30个循环；72 ℃延伸10 min。

4. 研究创新点

第一次从胡萝卜中克隆获得抗坏血酸过氧化物酶APX基因，完成胡萝卜逆境条件下的研究，揭示胡萝卜的抗逆能力，而胡萝卜作为伞形科植物的代表，这项研究对于伞形科植物逆境胁迫中的作用和提高其产量和品质具有重大的意义。

5. 研究计划与进展

1、研究计划：首先从胡萝卜黑田五寸品种中克隆获得胡萝卜apx基因，并对该基因进行较为详尽的序列分析，再利用实时定量pcr技术对其逆境条件下的表达进行了研究，最终明确胡萝卜apx基因在抵御逆境胁迫过程中的作用。

2、预期进展: 2014.6-2014.7胡萝卜 rna的提取及cdna的合成。

2014.8-2015.10 胡萝卜dcapx基因的克隆。