1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
一、研究意义适宜的温度是植物生长所必需的环境条件，而低温会使植物受到不同程度的伤害以致死亡，是限制农作物分布和生长的重要因素。
低温危害是农业生产中的一种严重的自然伤害，可以造成细胞物理性损害或死亡，给植物带来致命的损伤。
抗冻蛋白是在适应低温过程中产生的抗寒功能蛋白之一，研究植物抗寒性，对其功能进行鉴定，不仅可解决一些理论问题，也可相应地解决一些生产问题，避免不必要的损失。
2. 研究的基本内容和问题
一、研究目标 通过对胡萝卜抗冻防御过程中的结构特征、物质代谢、以及抗冻蛋白afp基因的克隆和功能验证等方面进行深入研究，为揭示胡萝卜抗冻机理奠定基础，同时也为胡萝卜抗逆育种提供理论依据。
二、研究内容 1、比较室温和低温胁迫下胡萝卜内部超微结构特征，探讨低温冻害对胡萝卜细胞内部结构的损伤。
2、胡萝卜抗冻蛋白afp的克隆以及基因功能初步分析。
3. 研究的方法与方案
一、研究方法以胡萝卜幼苗为材料，取嫩叶，用试剂盒法提取其总rna，利用rt-pcr技术分离胡萝卜的抗冻蛋白afp基因，构建其克隆载体，进行质粒酶切等操作，构建其表达载体，使用农杆菌介导转化法转化拟南芥。
二、技术路线 1. 胡萝卜幼苗→低温冷冻处理→细胞超微结构变化→相关生理指标测定 2. 提取胡萝卜幼苗总rna→进行pcr扩增→目的片段的回收与载体构建→抗冻基因afp植物表达载体的构建→农杆菌介导法转化拟南芥→转基因拟南芥抗寒性检测 三、实验方案 1、胡萝卜总rna提取采用试剂盒法，提取取胡萝卜苗幼叶中的总rna。
2、胡萝卜afp基因分离 从genbank数据库中查找胡萝卜afp基因序列，利用primerpremier5.0软件，设计简并引物，利用rt-pcr和race技术，从胡萝卜中克隆抗冻蛋白afp基因。
4. 研究创新点
抗逆育种在植物育种中具有重要价值，抗逆机理研究的重要性日益突出。
胡萝卜抗逆育种利用还处于初级阶段，对其抗逆机理尚不十分清楚。
本项目拟对胡萝卜抗冻性进行细胞生物学分析，同时结合抗冻蛋白afp基因的分析，为揭示胡萝卜抗冻机理奠定基础，为胡萝卜抗逆育种利用提供理论依据。
5. 研究计划与进展
2014年11月-2014年12月 进行相关资料熟悉查询，进行相关基因克隆、表达载体构建 2014年12月-2015年4月 整理所有实验结论并撰写研究论文 2015年4月-2015年5月 完成项目设计的工作任务，准备材料以及提交研究成果，申请项目验收
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