切花菊磷酸盐转运蛋白Pht1的克隆和表达分析开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1目的意义菊花[dendranthema grandiflorum (ramat.) kitamura]为菊科菊属栽培种，原产我国，是我国十大传统名花和世界四大切花之一，全球切花菊消费量仅次于月季，位居第二。

磷是菊花生长发育中不可缺少的重要营养元素之一，在生殖生长期菊花对磷的需求量最大[1]；缺磷往往导致植株干物质合成减少、叶片凋落、产花量减少、花品质下降[2]。

切花菊缺磷，叶常为灰绿色，叶基部颜色较浓，下位老叶易脱落，并逐渐向上扩展。

2. 研究的基本内容和问题

1研究目标克隆获得菊花磷酸盐转运蛋白pht1家族基因cm pht1；阐述其在不同组织器官中的表达差异。

2研究内容克隆获得菊花磷酸盐转运蛋白pht1家族基因cm pht1；检测不同组织器官（根、茎、叶等）中cm pht1基因表达量差异。

2.1克隆菊花高亲和力磷酸盐转运蛋白基因cm pht1兼并引物设计、rt-pcr扩增、3，5-race扩增，测序、拼接，序列比对。

3. 研究的方法与方案

1研究方法根据genbank中已知的高亲和磷酸盐转运蛋白pht1家族基因编码的蛋白质保守区分别设计简并引物，rt-pcr 扩增获取目的基因中间片段，race 法扩增获得目的基因3和5端，测序、序列拼接、同源性比对（blastx）；根据拼接结果设计全长引物，从而获得该基因的全长序列；采集不同磷浓度处理下菊花不同组织器官（根、茎、叶等），提取rna，核酸仪定量rna浓度，保证其纯度，通过实时定量rt-pcr检测目的基因的表达量得到cm pht1基因在不同组织器官及不同磷浓度处理下的表达特点。

2技术路线3实验方案实验材料为磷高效利用的切花菊品种南农银山，取0.1g幼嫩叶片，采用trizol rna试剂盒（invitrogen）提取rna。

rna于-70℃冰箱保存备用。

4. 研究创新点

1研究材料有特色：本研究拟采用的南农银山为磷高效利用品种，是研究磷酸盐转运蛋白基因与磷吸收转运分子机制的理想材料。

2研究内容有创新：开展菊花Pht1基因家族成员CmPht1的克隆，探讨组织器官目的基因响应于磷浓度的表达特征。

5. 研究计划与进展

1研究计划2013年9-10月：进行文献查阅，设计并得到一个可行的实验方案。

2013年10月：切花菊品种南农银山幼嫩叶片采集，提取rna。

2013年11月中下旬-2015年5月初：根据genbank中已知的保守区设计简并引物；进行rt-pcr 扩增获取高亲和磷酸盐转运蛋白pht1家族基因编码的蛋白质基因中间片段；进行3-race和5-race，获得目的基因3和5端，测序、序列拼接、同源性比对；根据拼接结果设计全长引物进行pcr扩增获得该基因的全长序列。