菊花RNA聚合酶II CTD磷酸酶1基因CmCPL1的克隆与表达分析开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

菊花(dendranthema morifolium)为菊科菊属宿根草本花卉, 该属各种主要分布于亚洲温带和亚热带部分地区, 具有极高的观赏价值。

同时是我国的传统花卉以及位居世界四大切花之首。

菊花在人类日常生活中又重要作用。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标：探究cmcpl1与菊花抗逆性的关系。

研究内容：1.克隆得到cmcpl1基因的cdna全长序列，利用生物信息学手段初步分析该基因及其编码蛋白的结构和功能；2.通过实时荧光定量pcr（聚合酶链式反应）技术（用于扩大扩增特定的dna片段的生物技术）分析该基因在多种非生物胁迫下的表达模式，为通过基因工程手段培育具抗逆性菊花品种提供候选基因资源，为菊花分子育种提供理论依据。

拟解决的关键问题：cmcpl1是否与菊花抗逆性有关。

3. 研究的方法与方案

实验方案：1. 植物材料与处理：实验首先剪取长势一致的神马插穗扦插于基质中进行培养，两周后进行不同的胁迫处理。

分别采集经过不同处理，包括低温（4 ℃）、nacl（200 mmoll-1）、aba（50 mmoll-1叶面喷施，对照组配施去离子水）、peg 6000（20%）和缺铁处理（fe-edta 0 μmoll-1），基础营养液成分为：kno3 1.67 mmoll-1、kh2po4 300 μmoll-1、mgso4250 μmoll-1、k2so4 300 μmoll-1、cacl2 750 μmoll-1、fe-edta 15 μmoll-1、h3bo3 45 μmoll-1、mncl2 4.5 μmoll-1、znso4 1 μmoll-1、h2moo4 0.13 μmoll-1、cuso4 0.16 μmoll-1， ph = 5.8（朱晓晨，2014）下的菊花根、茎、叶、花在液氮中速冻用于基因的组织特异性表达分析。

2. 总rna 的提取和cdna 合成：采用rnaiso plus 提取采集保存的菊花组织材料的总rna，并用dnaase去除基因组dna污染。

4. 研究创新点

国内外对于植物cpl1的研究多集中于模式植物拟南芥的研究（atcpl1），在其他植物中的cpl1的作用尚不清楚。

cpl1作为调控rna聚合酶ii磷酸化水平的重要因子，在植物逆境响应过程中扮演重要角色。

目前，对于植物cpl1在逆境响应中的表现的功能说法不一。

5. 研究计划与进展

2015.3-2015.4用引物cpl1-f、cpl1-r进行pcr扩增，经blastp比对结果，如果所得基因编码的氨基酸与其他植物cpl1的氨基酸序列具有较高的同源性，则表明新克隆的cdna序列为基因，并将该基因命名为cmcpl1。

2014.4-2015.5剪取长势一致的神马插穗进行培养以及对照实验准备。

两周后进行不同的胁迫处理。