梨PyNAC基因的克隆与表达特性的研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1、 本课题的目的及意义梨果实大小是商品梨果实的重要外观品质之一，随着单果质量增大，果实可溶性总糖、可溶性固形物含量呈下降趋势，石细胞含量增加。

因此，梨果实大小是决定梨果实品质的重要因素。

梨果实的大小与质量除了与栽培管理因素相关外，遗传因素是决定梨果实大小的决定性因素。

2. 研究的基本内容和问题

基于实验室师姐已有的梨的pynac基因的克隆、序列分析、梨pynac转录因子的pcambia1301表达载体构建、表达载体导入农杆菌细胞等实验成果，在此基础上，进行后续实验。

使用农杆菌介导的遗传转化方法转化模式植物micro-tom番茄，成功转化并得到再生株系。

通过对阳性番茄植株与对照植株果实重量的比较，来验证梨中的nac转录因子是否在果实生长发育过程中发挥重要作用，从而为梨果实的遗传改良提供基因资源。

3. 研究的方法与方案

研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析 1、番茄苗的种植 以micro-tom番茄种子为材料，将其用75%乙醇浸泡30s，挑选饱满种子，用10%次氯酸钠溶液浸泡8min，用无菌水冲洗4~5次，然后把种子平铺到番茄萌发培养基表面。

生长在25℃的条件下，光周期为16小时光照与8小时黑暗相互交替。

2、导入表达载体的农杆菌液的配制 农杆菌细胞在添加50mg/l 卡那霉素的lb培养基中过夜培养， 振荡（200rpm，28度），再悬浮，并调整到合适浓度od600=0.6，以待浸染植物材料。

4. 研究创新点

用带有梨目的基因PyNAC的农杆菌侵染番茄幼苗，再对外植体进行组织培养，获得带有目的基因的番茄株系。

5. 研究计划与进展

番茄种子，消毒处理种子平铺到萌发培养基表面14天后，切取外植体(下胚轴、子叶)预培养培养基上，1天转移到调好OD600=0.6的农杆菌液中，摇5~10分钟转移到暗培养基，2天用5瓶50mldd水(灭过菌)洗五次，第一次和第二次分别加100ul、50ul头孢cef转移到筛选培养基,每两周继代一次，直到长出不定芽不定芽转移到生根培养基上，每瓶3-4个将已生根的，株高4-5cm、根长约3-5cm的株系，逐一松开瓶口，适应3-4d将根上培养基洗净移栽于装有基质的小钵中。