1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
1.1 研究意义在自然界中,由同一物种经过基因组自发或者人工加倍形成的多倍体,称为同源多倍体。
例如,经济作物马铃薯就是一种天然形成的同源四倍体,大麦、烟草、油菜等通过秋水仙素等化学药剂诱导获得了同源多倍体(parisod et al. 2010; yamauchi et al. 2004)。
与二倍体相比,同源多倍体大多表现出细胞体积增大,或者某些器官的巨大化,这种巨大化往往表现在叶片、花瓣、茎秆和株高等有限生长的器官或组织上,但是多倍体化却很少导致整个植株的巨型化,有时甚至相反,这是因为植株的体积不仅取决于细胞的体积,还取决于生长期间所产生的细胞数目(abel and becker 2007; parisod et al. 2010)。
2. 研究的基本内容和问题
2.1 研究目标在获得了18个tcp基础上筛选出差异较大的一个tcp进行表达分析和功能验证。
2.2 研究内容 (1)在已获得的18个tcp基因的基础上进行定量表达分析,筛选出多倍体化前后表达量差异显著的tcp基因。
(2)筛选后的cntcpx的亚细胞定位、转录激活活性和启动子克隆。
3. 研究的方法与方案
3.1 研究方法1.荧光定量分析:18个tcp在多倍体后的表达分析(荧光定量pcr),看基因的表达差异,然后筛选出表达有差异的基因,分析差异基因的差异位点,做点突变,看转录激活活性是否有差异。
2.亚细胞定位:通过酶切反应构建pentr1a-cntcpx 入门载体,通过lr 重组反应构建亚细胞定位载体pmdc43-cntcpx,通过基因枪轰击洋葱表皮确定cntcpx 的亚细胞定位。
3.转录激活活性:采用酵母单杂交实验确定cntcpx 转录激活活性。
4. 研究创新点
本实验拟克隆与生长发育相关性较高的TCP转录因子家族,分析其在多倍体化后的变化模式,进一步探讨菊属植物基因组冲击对基因表达模式的影响。
5. 研究计划与进展
5.1年度研究计划(1)2014年122015年01月查阅相关文献,确定试验方案和技术路线(2)2015年02月2015年03月实验材料的培养,载体的构建(3)2015年04月2015年05月统计数据,分析结果,撰写毕业论文。
5.2预期结果(1)通过多倍化菊花脑后观察其变化模式,从形态和分子两方面分析基因组变化对基因表达的影响(2)完成毕业论文。
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