荷花实时荧光定量PCR分析中内参基因的选择开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1.1 本课题意义本研究第一次对荷花（nelumbo nucifera）的内参基因的表达稳定性进行了系统的分析，以期针对不同实验条件筛选出最稳定的内参基因，为后续研究荷花中重要基因的定量表达提供必要的校正依据。

1.2 国内外研究概况实时荧光定量pcr（quantitative real-time pcr, qpcr）可以检测到极少量的起始特异核苷酸序列。

然而，正因其灵敏性，很多因素可能导致数据分析的巨大偏差【1】。

2. 研究的基本内容和问题

2.1 研究的目标筛选出在荷花（Nelumbo nucifera）的根、茎、叶和花组织中表达稳定的内参基因，将其作为标准，消除大多数在实时荧光定量PCR实验前和过程中引入的变量，为后续研究荷花中重要基因的定量表达提供必要的校正依据。

2.2 研究的内容和拟解决的关键问题本研究分析12个常见的看家基因在荷花（Nelumbo nucifera）不同组织（根、茎、叶和花瓣）中的表达量水平及表达稳定性，选择表达量适中且表达稳定性较好的基因作为内参基因。

3. 研究的方法与方案

3.1 研究方法本研究以荷花（nelumbo nucifera）不同组织（根、茎、叶和花瓣）为材料，利用qpcr探讨了12种常见的看家基因：tua、gapdh、eif4a、anx、act、fpgs、trya、pgk、eef1a、cul、lug及hprt的表达情况，经genorm、bestkeeper和normfinder程序统计学计算处理，综合分析个候选内参基因的表达稳定性，选择表达量适中且表达稳定性较好的基因作为荷花不同组织中的内参基因。

3.2 实验方案3.2.1 材料荷花芸雅（nelumbo nucifera yunya）培养于江苏省苏州市金湖千艺莲农业科技有限公司的池塘中。

在适宜条件下培养一年后，采集荷花的根、茎、叶及花瓣样品，液氮速冻后，于-80℃储藏备用。

4. 研究创新点

在植物学研究中,常用的稳定表达的管家基因有tua、gapdh、eif4a、anx、act、fpgs、trya、pgk、eef1a、cul、lug及hprt等。

然而, 近年来大量的研究结果表明, 并没有表达绝对稳定的基因, 任何一种管家基因的所谓恒定表达都只是在一定类型的细胞或实验因素作用下有范围的恒定。

随着对定量要求的不断提高, 为得到更可靠的实验结果, 实验中需要选择较为合适的1个或多个内参基因进行校正。

5. 研究计划与进展

（1）2015.4-2015.6：从种子开始培养荷花，并对其进行盛花期处理。

（2）2015.7-2015.9：用生物信息学方法对荷花内参基因稳定性进行分析（3）2015.9-2016.3：全面总结实验结果，撰写毕业论文。