葡萄Rs基因的克隆、序列分析及时空表达特征鉴定开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1.1 研究意义

白藜芦醇（resveratrol 简称res）又称白藜三醇，化学名3,5, 4- 三羟基二苯乙烯( 3, 5, 4- thrihydroxys - tilbene) , 分子式c₁₄h₁₂o₃, 相对分子质量228.25,是植物体内天然二苯乙烯类多酚物质，在植物代谢中为次生代谢产物^[1]。它是植物体在恶劣环境下或遇到病原害时自身分泌的一种抗毒素^[2]。另外，它还具有许多医疗保健作用，如抗氧化、抗肿瘤、抗血小板凝聚、抗细菌和真菌、防止人体低密度脂蛋白（ldp）氧化等。因此，res 已成为科学家们高度重视的天然活性成分^[3]。目前，很多国家和地区都开发生产了白藜芦醇及其制品并应用于食品、医疗保健品和化妆品等领域。比如，日本将白藜芦醇作为食品添加剂，美国将白藜芦醇纳入膳食补充剂，我国也将白藜芦醇制成了天然保健食品^[4-6]。

res的合成受到 pal、4cl、c4h、sts(二苯乙烯合酶)、pmt (赤松素-甲氧基转移酶)甚至chs等多个酶促反应的调节控制，其中最关键的调节酶是rs。rs又被称为 3 ，4′，5-三羟基二苯乙烯合酶，为酮二聚物，是sts中的一类^[7]。

2. 研究的基本内容和问题

2.1研究目标

（1）葡萄果皮细胞培养体系的建立；

（2）利用农杆菌介导将白藜芦醇合酶基因（rs）转入葡萄皮愈伤组织，并分析不同处理因子对转基因与野生型细胞系中rs基因表达以及白藜芦醇含量的影响；

3. 研究的方法与方案

3.1研究方法

（1）葡萄果皮愈伤组织的诱导：基本培养基b₅ 3.21g/l，附加8.5g/l琼脂，30g/l 蔗糖，0.6mg/l6-ba和6mg/l naa，培养温度为(25士1)℃，暗培养。

（2）基因遗传转化的方法：农杆菌介导法。（参考：白藜芦醇的合成研究进展_黄卫文）

4. 研究创新点

4本项目特色或创新之处

（1）将转基因技术与植物细胞培养技术相结合，对比分析rs基因的作用及白藜芦醇含量的富集效果；

（2）通过几种不同的处理方案分别进行诱导，大幅度提高细胞中白藜芦醇含量，同时对比得出效果最好的诱导因素。

5. 研究计划与进展

5研究计划及预期进展

（1）2016.06-2016.09葡萄样品的采集、果皮的分离与保存；

（2）2016.09-2016.11建立葡萄果皮愈伤组织，同时提取、分离rs基因；