苹果超低温脱毒检测及技术体系的建立开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

苹果（malus pumilamill.）是蔷薇科苹果亚科苹果属多年生乔木，原产欧洲及亚洲中部。其果实味道香甜，口感爽脆，富含矿物质和维生素等丰富的营养元素，是世界四大水果之冠。且苹果是一种低热量水果，营养成分可溶性大，易被人体吸收，更是健康佳品。苹果的品种繁多，数以千计，其栽培历史已久，在全世界温带地区均有种植，我国亦是苹果的栽培生产和消费大国。

现阶段我国苹果品种的苗木繁殖以嫁接为主，容易受到病毒的侵染。苹果病毒病具有极强的危害性，并且传播速度快，发病后难治愈。它对果树的危害一种会直接表现在果实上，造成直接的经济损失，另一种则在感染后不直接表现在果实上，而是表现在叶片、枝条和主干上，逐渐削弱树势从而造成伤害（赵玲玲等，2013）。目前国内栽培的主要品种及砧木都普遍带有病毒，直接影响果树的生长势，降低果实品质和产量，严重时可以导致果树绝产甚至树体死亡。因此，苹果脱毒苗的应用将会显著有效地提高苹果品质和产量，各种脱毒技术和脱毒检测技术也都应运而生，成为苹果生产上的热门研究对象。

苹果病毒病分为非潜隐性病毒和潜隐性病毒两大类。目前世界上报道的苹果病毒病有39种，其中有25种非潜隐性病毒病，14种潜隐性病毒。在我国苹果主产区已鉴定出的苹果病毒有17种，其中明确重点检测的苹果病毒病有6种，分别为：苹果花叶病毒（apple mosaic virus, apmv）、苹果锈果类病毒（apple scar skin viroid, assvd）、苹果绿皱果病毒（apple green crinkle virus, agrcv）、苹果褪绿叶斑病毒（apple chlorotic leaf spot virus, aclsv）、苹果茎痘病毒（apple stem pitting virus, aspv）和苹果茎沟病毒（apple stem grooving virus, asgv）（王亚南等，2010）。其中，前3种病毒造成的病毒病属于非潜隐性病毒病，会在植株上表现出明显症状，果树感病后容易识别。而后3种病毒造成的病毒病属于潜隐性病毒，不会在栽培品种上表现出明显症状，必须要经过鉴定才能明确果树的带毒状况，并且一旦果树感染上潜隐性病毒病，会对果树的长势和结果情况产生严重的影响（赵玲玲等，2013）。苹果花叶病和苹果锈果病在全国各苹果产区均有发生；苹果绿皱果病仅在河南、甘肃、陕西、辽宁等地有报道。而苹果潜隐性病毒在我国各大苹果产区均普遍发生，国内目前的苹果主栽品种及砧木普遍带有病毒，带毒率一般为60%-80%，有些品种如金冠、红星等品种的带毒株率几乎达100%，且多为复合侵染，复合侵染率为60%-100%（王壮伟，2003）。被病毒病侵染的苹果树全身带有病毒，不但破坏树体的正常生理机能，使树叶黄化、生长势减弱、造成果实产量和品质下降，甚至引起树体死亡。而且苹果一旦感染上病毒，就很难防治。由于苹果病毒是通过嫁接传染，无传毒介体，所以栽培无病毒苗木，是防治的主要途径。因此，研究解决苹果及砧木的脱毒技术并建立脱毒技术体系对苹果生产栽培具有极高的现实意义与经济价值。

2. 研究的基本内容和问题

1 研究目标

本研究拟通过对苹果烟富3号、烟富10号、苹果砧木m9、t337和tp5个苹果品种材料茎尖进行超低温脱毒处理，使用rt-pcr技术对苹果褪绿叶斑病毒(aclsv)、苹果茎沟病毒(asgv)、苹果茎痘病毒(aspv)、苹果花叶病毒(apmv)和苹果锈果病毒(assvd) 5种病毒进行检测，建立并优化超低温脱毒技术体系。

2 研究内容

3. 研究的方法与方案

1 研究方法

对不同苹果材料的进行组织培养建立试管苗体系，并进行超低温处理。以未进行超低温处理的苹果植株作为对照，进行病毒检测。

2 技术路线

4. 研究创新点

①超低温脱毒技术应用于苹果烟富3号、烟富10号、苹果砧木T337、Tp还未见报道。

②有望建立广谱高效的苹果超低温脱毒技术体系。

5. 研究计划与进展

①2016年6月至2016年9月 详细制备试验方案，准备试验测定的药品和试剂，并进行组织培养建立试管苗体系；

②2016年10月至2017年3月 对苹果品种及其砧木组培苗进行超低温处理、pcr病毒检测、脱毒效率分析等过程，并建立超低温脱毒技术体系；

③2017年4月至2017年5月 进行数据整理，并进行撰写研究报告和毕业论文。