菊花CmHsfB1基因的克隆及其功能鉴定开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1. 本课题的意义

菊花（chrysanthemum morifolium）是多年生菊科菊属草本植物，原产中国，是我国十大传统名花和世界四大切花之一，目前世界菊花品种多至2-3万个（陈俊愉，2001），我国约有3000多个（李鸿渐，1981）。菊花有重要的观赏、药用、食用等价值，但随着切花菊的生产规模不断扩大和集约化生产程度的不断提高，虫害危害日益严重，严重影响了菊花的产量和品质。因此，对菊花的抗蚜性展开研究十分重要。

植物热激转录因子(heat stress transcription factors，hsfs) 是存在于细胞内调节热激蛋白表达的一类转录调节基因，在植物热胁迫信号转导和耐热性的产生过程中具有重要作用^［1］。热激转录因子通过识别并特异性结合在热激蛋白基因启动子区热激元件(heat shock element，hse) 的保守基序上，从而调控热激蛋白基因的转录和表达，进而提高植物的抗逆性。

2. 研究的基本内容和问题

1. 研究目标

获得cmhsfb1基因，并初步阐明该基因的抗蚜性功能及机理。

2. 研究内容

3. 研究的方法与方案

1. 研究方法

（1）蚜虫接种与蚜口数量统计　将待接蚜虫饥饿处理2h，而后用毛笔小心将两龄若虫接种到植株顶部的嫩叶上，每个植株用透气的隔离罩隔离，规格为25cm(长)12cm(直径)，以防止蚜虫在不同植株间转移。每株接种5头两龄若虫，每处理10株，重复3次。第7天开始统计，之后每隔2d调查供试植株上的蚜虫数量，连续统计2周。

（2）rna提取及反转录 采取不同组织器官以及蚜虫取食不同时间点的叶片。取叶片(0.15g)液氮研磨成粉,加入1ml rnaiso reagent完全覆盖,匀浆转移至2ml离心管,室温静置5min后12000rpm 4℃离心15min；上清液加入200μl氯仿震荡混匀,静置10min后,12000rpm离心15min，视情况多次抽提；吸取上清于新离心管,加入等体积异丙醇颠倒混匀,静置10min后12000rpm离心10min，弃去上清加入75%乙醇漂洗rna后12000rpm离心5min，弃去乙醇待其完全挥发后加入25μl depc水溶解。稀释10倍用于rna完整性检测和浓度测定,达到能够用于反转录标准后-70℃保存。rna反转录得到的cdna作为扩一增基因全长的模板,具体反转录过程参照试剂盒说明书,普通pcr检测反转录获得的cdna质量。

4. 研究创新点

1. HSFs在拟南芥、水稻、百合、大豆等植物中的作用都有相关研究，而其在菊花中的作用未见报道，对植物抗虫性的研究未见报道，本实验探究HSFs对菊花的抗蚜性，扩充了HSFs热激转录因子的功能研究。

2. CmHsfB1基因抗蚜性机理研究未见报道。

5. 研究计划与进展

1. 研究计划

本研究预期在13个月内完成，2016年4月-2017年5月。

2016年4月：进行前期工作，查找文献资料，完成研究方案的设计。

2016年5月： 克隆并分析菊花cmhsfb1基因表达特性。