蝴蝶兰叶肉细胞原生质体分离及融合条件研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1.1本课题意义

蝴蝶兰为兰科蝴蝶兰属（phalaenopsis）植物，是兰科植物中栽培最广泛，最受欢迎的种类之一（秦凡和周吉元, 2003）。因其花姿高雅，花色美丽，花期较长，在众多的热带兰中有洋兰皇后的美称。

蝴蝶兰属单轴性兰，只有一个生长点，不像其他大多数兰花那样可以分株繁殖。在自然环境中，其种子难以发芽，所以显得弥足珍贵（董国兴, 2004）。目前蝴蝶兰存在种性退化、远源杂交障碍等问题。分离纯化蝴蝶兰原生质体并在此基础上进行原生质体的融合与培养，可以获得种间甚至属间杂种，对蝴蝶兰品种改良和培育新品种有一定的意义。此外，以原生质体为受体，可以进行外源基因的转移，因此原生质体培养技术也是开展基因工程研究的有效手段。

2. 研究的基本内容和问题

2.1研究目标

（1）优化蝴蝶兰叶肉细胞原生质体分离和纯化条件；

（2）建立不同品种蝴蝶兰叶肉细胞原生质体融合条件；

3. 研究的方法与方案

3.1研究方法

3.1.1原生质体分离和纯化

（1）取不同品种蝴蝶兰无菌苗幼嫩叶片1.0 g，切成1.0 mm 1.0 mm见方的切块，放入10ml酶液中，置于25℃恒温摇床上以50 rpm震荡酶解5-7h，提取原生质体。酶解液成分为：不同浓度的的纤维素酶（1.0、1.5、2.0%），离析酶（0.3、0.5、0.7%）、7.0 mmoll^-1cacl₂2h₂o，0.7 mmoll^-1nah₂po₄2h₂o，3.0 mmoll^-1mes(c₆h₁₃no₄s)，甘露醇（0.3、0.4、0.5m），ph5.6。酶液经0.22μm混合纤维微孔滤膜过滤除菌及杂质。

4. 研究创新点

4.特色或创新之处

（1）建立蝴蝶兰叶肉细胞原生质体的融合体系，并对融合体再生条件进行研究；

（2）优化蝴蝶兰原生质体分离和培养方法，初步建立蝴蝶兰原生质体培养及再生体系。

5. 研究计划与进展

5.研究计划及预期进展