芹菜品种‘六合黄心芹’AgCCoAOMT基因的克隆及表达特性分析开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

本课题的意义、国内外研究概况、应用前景等（列出主要参考文献）膳食纤维包括纤维素、木质素、低聚糖和果胶等[1]，摄入适量的膳食纤维有益于人类的身体健康[2-3]。

木质素可参与构成植物细胞壁，其积累能够增强细胞壁的硬度，使蔬菜组织木质化，进而影响蔬菜的口感和品质[4]。

目前，有关木质素的研究及应用多涉及木材和造纸[5-6]、能源[7]和饲料[8-9]等方面，而对芹菜中木质素的相关研究报道尚不多见。

2. 研究的基本内容和问题

本课题以芹菜六合黄心芹为实验材料，克隆获得其CCoAOMT基因，对该基因及其编码的氨基酸序列进行分析和比较；并采用qRT-PCR 技术检测该基因在芹菜不同组织中和不同生长发育阶段叶片中的表达特性，以期为深入研究CCoAOMT基因在芹菜木质素代谢中的作用奠定研究基础，也为芹菜品质的改良提供基础数据。

3. 研究的方法与方案

利用本课题组芹菜转录组数据库，通过rt-pcr的方法，克隆获得芹菜agccoaomt基因。

采用生物信息学的方法分析了芹菜agccoaomt基因编码氨基酸的组成、理化性质、亲/疏水性、蛋白质的空间结构等。

通过荧光定量pcr，研究了六合黄心芹中agccoaomt基因的表达。

4. 研究创新点

（1）芹菜的品质与木质素密切相关，对芹菜木质素合成机理的研究，可以为深入研究芹菜木质素代谢提供理论依据。

（2）本项目通过对芹菜六合黄心芹的三个阶段、四个不同部位的分析，结合芹菜木质素agccoaomt基因的克隆、分析、表达研究，能够获得较为详实的此基因表达情况，研究上可操作性强。

（3）本课题通过检测芹菜中合成木质素的相关基因agccoaomt的表达，进一步丰富了芹菜中木质素合成的机制的研究。

5. 研究计划与进展

计划从2016年5月开始课题研究，预期进展如下：1、2016年8月，完成了芹菜品种六合黄心芹的种植与三个时期（25d、45d、65d）以及芹菜的根、茎、叶、叶柄四个部位的取样收集，样品液氮速冻并保存于-80℃冰箱。

2、2016年9月中旬，基于本课题组已获得芹菜转录组数据库，完成了引物设计、初步检测与回收、连接、转化、挑菌、最后检测等步骤，克隆出了agccoaomt基因，并送到南京金斯瑞公司测序。

3、2016年10月初，完成了agccoaomt基因的荧光定量pcr。