转录因子SPL9在葡萄果实发育过程中的功能分析开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1. 研究意义本项目拟结合qrt-pcr 技术手段、番茄瞬时转基因等方法阐释spl(squamosa promoter binding protein-like) 转录因子基因spl9调控葡萄果实发育成熟的分子机制。

通过pcr的方法从葡萄品种藤稔果实中克隆出spl9基因的 cdna 全长序列，通过qrt-pcr分析spl9在aba、naa、水处理过的葡萄中的表达量和不同生长时期葡萄的表达量，并利用超表达技术验证spl9的生物学功能。

本项目的完成有助于有效利用基因调控葡萄果实发育成熟过程，改变果实成熟期提供理论依据；也为其它果树果实成熟的分子调控机制的研究提供重要参考。

2. 研究的基本内容和问题

1、研究目标⑴ 认识spl9在葡萄果实发育的不同时期的时空表达特征；⑵ 通过aba、naa、水处理验证spl9基因的生物学功能。

⑶ 通过转基因技术鉴定spl9的生物学功能，阐释它对调控葡萄果实发育生长的影响。

2、研究内容为认识spl（squamosa promoter binding protein-like）转录因子调控非呼吸跃变型葡萄果实发育成熟的分子机制，申请人拟在前期实验室的研究基础上，结合模式植物spl9基因相关研究，以生产上广泛栽培的鲜食葡萄藤稔为试材，通过aba和naa处理，结合qrt-pcr (real time rt-pcr)、转基因等多种方法阐释spl转录因子调控葡萄果实发育成熟的分子机制。

3. 研究的方法与方案

1、研究方法（1）试验材料：葡萄栽培品种藤稔，采集花后2至14周葡萄果实以及aba、naa处理的8个时期的葡萄用于spl9表达水平的分析。

取材后用液氮迅速冷冻，于-80℃超低温冰箱中保存。

（2）果实总rna的提取：采用华越洋生物（北京）科技有限公司生产的多糖多酚植物专用 rna 提取试剂盒（quick rna isolation kit）。

4. 研究创新点

特色或创新之处研究预期成果上的创新：模式植物拟南芥、水稻的研究表明，spl转录因子家族的多个成员参与植物果实发育的多种生理代谢过程。

但是，与拟南芥、水稻果实具有显著不同的葡萄乃至其它果树方面尚未见spl调控果实发育成熟的分子机制的报道。

前期初步研究发现，葡萄spl9可能参与果实发育成熟过程的分子调控。

5. 研究计划与进展

1、研究计划计划时间 预期进展2016.3-2016.5 实验开展的准备工作，主要是购买所需试剂盒、易耗品以及植物实验材料的确认及采集。

2016.5-2016.8 分别构建葡萄果实的不同发育时期的mrna文库以及aba、naa处理与对照果实的mrna文库。

并进行实时荧光定量pcr分析，分析spl9在不同时期葡萄果实中的表达水平差异。