农杆菌介导君迁子遗传转化体系的建立开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

君迁子又名黑枣，根系发达，成活率高，寿命长，与柿树的许多优良品种嫁接亲和性强，是中国北方常用的砧木。通过转基因技术改良君迁子性状获得矮化型，可为柿树提供更好的砧木品种，也是柿树育种的重要方法。

在国内外研究中，获得转基因改良品种可通过建立高效离体再生体系和转基因技术实现。目前对于君迁子离体再生体系国内已有研究，无菌苗第3、4片叶片基部上表面朝下接种于 1/2ms zt 5.0 mgl^-1 iba 0.01 mgl^-1的培养基，先期暗培养 5 周后转移至正常光照下培养效果最好，愈伤组织形成率、不定芽再生率和外植体平均不定芽数分别为 100.0%、85.3%和 2.80.6 个。再生芽接种于不含植物生长调节剂的 1/2ms 培养基上，30 d 时生根率达100%，平均根数和平均根长分别达 5.4 条和3.7 cm。再生植株炼苗后移栽，30 d 时成活率达 98.5%^[1]。目前已应用的各种植物转基因方法中，农杆菌介导法是研究最清楚的一种，在百余种问世的转基因植物中，80%是由农杆菌介导转化的。与其他方法相比，农杆菌介导法获得稳定转化体的频率高且重复性好^[2]。农杆菌转化是将t-dna随机地整合到植物受体细胞基因组中^[3]。将农杆菌中原始的t-dna替换成目的基因是如今将外源基因引入植物体内的最有效方法^[4]。农杆菌介导之前被认为是只在双子叶植物才能成功，而目前，通过农杆菌介导的单子叶植物遗传转化已经在众多物种中获得成功，如禾本科的小麦、水稻^[5]。也有人通过农杆菌介导的acc合成酶基因对磨盘柿进行遗传转化构建并成功^[6]。而利用农杆菌介导目的基因对君迁子进行遗传转化的研究尚未有发表，本课题便是通过几组分项实验来探讨并筛选农杆菌达成侵染君迁子有效的条件范围。

[1] 谢启鑫，黄美连，吴晓萍，庄东红 .君迁子叶片培养再生植株的研究[j]中国农业科学 2008,41(2):607-612

2. 研究的基本内容和问题

二. 研究的目标：君迁子遗传转化体系的建立

三．研究内容：1.不同浓度的抗生素对君迁子叶片的分化情况

2.不同浓度下的农杆菌对君迁子叶片的侵染情况

3. 研究的方法与方案

1、农杆菌菌株 eha105生长曲线的测定

在菌株活化过程中，从 yeb 固体培养基上挑取单菌落，接种到 50ml yeb 液体培养基中，每隔 2h 取菌液 2.5m l，用分光光度计测菌液的 od₆₀₀值。三次重复，记录数据，并绘制菌株生长曲线图。

2、君迁子叶片对抗生素敏感试验

4. 研究创新点

六．特色或创新之处

本次课题是通过柿树的再生体系进行转基因，对于柿树再生体系与转基因的方面的研究本来不多，本课题研究的品种君迁子其转基因尚未有人研究。

5. 研究计划与进展

目前已完成至研究方法第二步，君迁子对抗生素的敏感性试验

2016.6月，君迁子对抗生素的敏感试验。

2016.7、8月，进行预培养；另外进行农杆菌浓度筛选、菌液侵染时间筛选、as浓度筛选、共培养时间筛选。