月季BBX5基因的克隆与功能验证开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

课题的意义、国内外研究概况、应用前景等（列出主要参考文献）1.课题的意义月季（rosachinensis）一年内多次开花，故推测其对光周期不敏感。

除光周期途径之外，植物成花还有赤霉素途径、年龄途径，春化途径和自主途径等。

在光周期途径中，co是感受光周期的核心因子，通过感受光信号的节律表达来调控下游ft等成花基因的表达。

2. 研究的基本内容和问题

.研究的目标：提取月季bbx家族中的col4基因，通过一系列转化克隆，转入月季中，观察转入目的基因后月季出现的表型，在月季中对其功能进行验证。

2.研究的内容提取月季rna,反转录合成cdna,设计目的基因的引物，目的基因扩增，目的基因的纯化，将目的基因连入入门载体，转化大肠杆菌，筛选出成功转化的大肠杆菌进行送测，提取质粒，目的基因连入表达载体，转化大肠杆菌，提取质粒，转化农杆菌，用带有目的基因的农杆菌侵染月季，以对col4基因的功能进行验证。

3.拟解决的关键问题选取最合适高效准确的方法将目的基因col4转入月季中，并对其进行功能验证，以明确月季col4基因的功能以及其在月季成花过程中所起到的作用。

3. 研究的方法与方案

1.研究方法与实验方案①月季rna的提取（参照foregene公司试剂盒的说明书）（1）取500μl buffer psl1于2ml离心管中，加入10μlβ-巯基乙醇，混匀待用。

（2）取适量新鲜月季叶片，尽量剪碎，至于预冷的研钵中，加入液氮充分研磨（破碎植物细胞）。

（3）迅速称取50mg研磨好的新鲜月季叶片粉末，转移至buffer psl2中剧烈震荡混匀，室温静置5min。

4. 研究创新点

本课题对月季col4基因进行克隆与功能鉴定，是国内外的研究中鲜有的。

对月季col4基因的功能鉴定是了解月季co基因乃至bbx家族基因在月季成花中的作用的必不可少的一部分，有利于解析月季连续开花的调控机制。

此机制对于蔷薇科植物有一定的通用性，可以提升园艺产品的市场竞争力。

5. 研究计划与进展

2017.12-2018.1开展试验研究，提取月季rna，反转录合成cdna，cdna扩增得到目的基因，目的基因连入入门载体，表达载体，带有目的基因的农杆菌侵染月季插苗，培养月季扦插苗等待开花。

2018.2-2018.3对转化月季进行col4基因功能鉴定。

2018.4整理实验结果，数据，进行讨论，撰写毕业论文。