黄瓜钙调素类似蛋白编码基因CML25的启动子克隆开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

一、 本课题的意义黄瓜（cucumis sativus l.）是葫芦科黄瓜属的蔬菜作物，对我国全年蔬菜供应具有重要的作用。

但在实际生产中由于外界不良条件以及黄瓜种苗不佳等自身原因，其生长过程中存在许多生理异常现象，花打顶现象是其中普遍存在较为严重的一种。

花打顶是指有的在黄瓜植株生长过程中, 植株顶端不形成正常的 龙头, 却形成了一簇紧凑的雌花, 使瓜秧不能正常伸长, 形成矮化状态。

2. 研究的基本内容和问题

1.1研究目标（1）获得CML25基因启动子的生物信息（2）克隆CML25基因启动子并测序验证（3）构建表达载体，分析CML25基因启动子的调控机制与功能。

1.2 研究内容为了进一步研究CML25基因对黄瓜有性生长的调具体控机制，本研究以CML25基因为实验材料，通过对CML25基因的初步测序，使用软件分析比对预测含有启动子的序列，利用PCR技术克隆出基因的启动子，进行测序鉴定，并构建荧光蛋白报告基因表达载体，分析CML25基因的调控机制，为之后的研究奠定基础。

3. 研究的方法与方案

2.1 研究方法采用plantcare等数据库分析cml25基因启动子元件序列；采用pcr技术，对cml25基因启动子进行克隆；使用不同长度的启动子片段区域，构建荧光蛋白报告基因表达载体，进一步分析启动子元件的作用机制。

2.2 技术路线对cml25基因启动子进行生物信息学分析设计克隆cml25基因启动子的引物构建pcr反应体系，进行pcr扩增产物检测及回收纯化双酶切：挑选阳性克隆菌体进行质粒提取，双酶切目的基因及报告基因，进行t4连接热激转化：连接产物转大肠杆菌，涂板培养。

挑取单菌落进行菌落pcr鉴定，并双酶切、测序验证将构建好的表达载体转染农杆菌，并用其侵染黄瓜分析cml25基因启动子转录机制2.3 实验方案 1. 使用plantcare等数据库对cml25基因进行启动子生物信息学分析。

4. 研究创新点

（1）目前尚未有关于黄瓜果实发育与 cml 的相关系统研究。

本实验在前人实验的基础上，继续对 cml25基因进行研究，通过pcr技术克隆cml25基因启动子，从而为进一步研究 cml25 基因促进黄瓜单性结实的机制打下基础。

（2）利用pcr技术克隆启动子。

5. 研究计划与进展

（1）2017.6-2017.7 进行cml25基因启动子生物学分析。

（2）2017.9-2017.12 完成cml25启动子克隆以及荧光蛋白表达载体的构建。

（3）2018.2-2018.4 整理测序结果，分析实验结果，撰写论文。