菊花CmREV基因的克隆及表达特性研究开题报告

 2022-01-21 21:56:20

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

1.本课题的意义菊花(chrysanthemum grandiflorum)是菊科菊属的多年生草本植物,在我国有着悠久的栽培历史,是中国十大传统名花、花中四君子和世界四大切花之一,具有极高的观赏、食用和药用价值,深受人们的喜爱。

迄今为止,国内外菊花育种者利用极其丰富的种质资源,通过常规杂交育种手段在株型、叶型、花型、花色等观赏性状改良方面取得了卓有成效的业绩。

microrna(mirna)是一类长度很短的非编码调控单链小分子rna,其中mir165/166基因和它们的靶标基因hd-zip iii的多样性可以介导植物生长和发育的多个方面。

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2. 研究的基本内容和问题

1.研究目标获得REV基因,并初步研究该基因在菊花中的表达特性。

2.研究内容(1)克隆菊花REV基因;(2)该基因在菊花不同组织器官的定量分析;(3)5' RLM-RACE验证miR165/166的靶基因剪切位点;(4)亚细胞定位分析; (5)转录激活活性分析;3.拟解决的关键问题(1)完成REV基因的克隆及同源转化(菊花)和异源转化(拟南芥);(2)组织定量分析;(3)初步探究REV基因的功能及机理。

3. 研究的方法与方案

1.研究方法(1)rna提取及反转录 取组织(0.15g)液氮研磨成粉,加入1ml trizol完全覆盖,匀浆转移至2ml离心管,室温静置5min后12000rpm 4℃离心15min;上清液加入200μl氯仿震荡混匀,静置10min后,12000rpm离心15min,视情况多次抽提;吸取上清于新离心管,加入等体积异丙醇颠倒混匀,静置10min后12000rpm离心10min,弃去上清加入75%乙醇漂洗rna后12000rpm离心5min,弃去乙醇待其完全挥发后加入25μl depc水溶解。

稀释10倍用于rna完整性检测和浓度测定,达到能够用于反转录标准后-70℃保存。

rna反转录得到的cdna作为扩一增基因全长的模板,具体反转录过程参照试剂盒说明书,普通pcr检测反转录获得的cdna质量。

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4. 研究创新点

REV基因在拟南芥中研究最多,而其在菊花中的作用尚未见报道,对菊花表达特性的研究也未见报道,因此本实验探究REV对菊花的影响。

5. 研究计划与进展

第一阶段:2017.04-2017.06(1) 进行实验前期工作,查阅相关文献资料,熟悉实验流程、实验内容、实验步骤等;(2) 栽培菊花品种神马。

第二阶段:2017.06-2017.09(1) 克隆菊花rev基因;(2) 该基因在菊花不同组织器官的定量分析;(3) 5' rlm-race验证mir165/166的靶基因剪切位点。

第三阶段:2017.09-2018.02(1) 亚细胞定位分析; (2) 转录激活活性分析;(3) 初步探究rev基因在菊花生长发育过程中的作用。

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