荷花NnEIN2基因的克隆、表达及过表达载体的构建开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1)乙烯的信号转导途径目前认为，乙烯的生物学效应是通过乙烯信号转导途径得以实现的。

通过对模式植物拟南芥的乙烯突变体和基因的研究，乙烯信号转导途径的线形信号转导模型已建立。

即乙烯→etr家族→ctr家族→ein3/eils→erf→乙烯反应相关基因的表达[1-2]（图1）。

2. 研究的基本内容和问题

研究的目标、内容和拟解决的关键问题1、研究目标：1)丰富和完善荷花耐镉性理论，为将其应用于镉污染水体的植物修复提供重要科学依据。

2)为未来利用分子生物学手段对荷花进行基因改造，创造具有自主知识产权的优良耐镉品种奠定理论基础。

2、研究内容：1)基于最近中国科学院武汉植物园与美国、澳大利亚科学家合作完成了中国古代莲基因组测序结果，对荷花乙烯信号转导途径基因ein2进行构建表达载体，通过农杆菌介导法转入本氏烟，验证其功能，进而明确荷花乙烯信号转导途径中参与调控镉胁迫的关键因子。

3. 研究的方法与方案

研究方法1、总RNA的提取2、cDNA合成3、qRT-PCR扩增4、构建过表达载体，通过农杆菌介导法将EIN2基因转入本氏烟，验证其功能技术路线、可行性分析1.具有良好的研究基础2.项目思路清晰新颖，技术方法可行3.具备相应的研究平台和软硬件支撑条件

4. 研究创新点

特色或创新之处对于乙烯生物信号转导途径各元件组分在调控抗氧化系统中的作用研究仅局限于拟南芥等模式植物的少数乙烯相关基因中。

荷花作为我国重要的水生植物，具有修复重金属污染水体的潜能，国内外针对荷花重金属耐性的研究仅停留在响应重金属胁迫中的生理生化变化水平上，迄今为止，关于乙烯信号转导相关基因在荷花等水生植物响应重金属胁迫中的作用及调节机理研究尚未见报道。

5. 研究计划与进展

研究计划及预期进展研究计划1、2017.04-2017.06，与老师积极沟通，确定实验具体做什么，采集样品，处理，并通过各种途径补充与本项目相关的知识。

2、 2017.07-2018.04，实验开展，对荷花乙烯信号转导重要基因ein2构建表达载体，通过农杆菌介导法转入本氏烟草，验证其功能，进而明确荷花乙烯信号转导途径中参与调控镉胁迫的关键因子。

3、2018.05,运用老师所教的知识以及自学相关知识，根据研究实验结果撰写毕业论文。