葡萄谷胱甘肽抗氧化系统相关基因响应盐胁迫的机制分析开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1研究意义土壤盐渍化是限制农业发展的一个世界性问题。

据资料统计，目前全世界约有10亿公顷盐碱地，约占世界陆地总面积的 7、6％。

我国是世界上盐碱地大国之一 ，盐碱土地面积约为0．27亿公顷，近年来，随着人口数量不断增加，耕地面积日益减少，选育耐盐植物品种，探索盐碱地植物种植模式成为盐碱地开发当务之急。

2. 研究的基本内容和问题

1研究目标（1）以葡萄茎段为培养材料建立组培体系；（2）重要基因的筛选与表达分析；（3）用筛选出的重要转录因子侵染葡萄果皮愈伤组织以及在番茄上进行瞬时表达，观察对照转基因体系与野生体系葡萄果皮愈伤组织和番茄盐害程度的变化；（4）阐释谷胱甘肽抗氧化系统相关基因在盐胁迫中的调控作用。

2研究内容（1）以美人指和黑比诺茎段为原始材料，经组织培养使其形成新植株；（2）对组培苗进行定期采样和继代；（3）克隆基因；（1）构建载体，连接转化；（2）对愈伤组织进行侵染；（3）在番茄上进行瞬时表达；（7）对比分析转基因体系与野生体系葡萄果皮愈伤组织和番茄果实抗盐性的变化，初步阐释谷胱甘肽抗氧化系统在葡萄抗盐胁迫中的调控作用。

3拟解决的关键问题（1）构建葡萄茎段培养体系；（2）克隆基因并构建载体，利用农杆菌介导法转入葡萄果皮愈伤组织；（3）分析转基因体系中谷胱甘肽抗氧化系统相关基因的表达造成的与野生体系的差异

3. 研究的方法与方案

1研究方法（1）葡萄茎段的组织培养：1/2ms （0.3-0.5）mg/liba 15g/l蔗糖 8.5g/l琼脂 0.5g/l活性炭（2）基因遗传转化的方法：农杆菌介导法2技术路线不同浓度盐胁迫处理下培养组培苗，定期采样↓克隆基因，构建载体↓ 连接转化↙↘侵染愈伤组织 番茄瞬时侵染↓对比实验组与对照组，得出结论3试验方案3.1葡萄组培苗的诱导与继代以从组培苗上取带叶芽的茎段，接种于培养基上，每个培养基接种1-2个，25士1℃条件下全光照培养。

继代时选取幼嫩带芽茎段，均匀接种于培养基上，每个培养基接种1-2个，25士1℃条件下全光照培养。

3.2利用农杆菌介导法将相关基因转入葡萄皮愈伤组织根癌农杆菌的ti质粒上有一段转移dna（t-dna），具有向植物细胞传递外源基因的能力，而细菌本身并不进入受体细胞。

4. 研究创新点

通过几种不同的处理方案分别进行培养，探究葡萄组培苗受盐胁迫情况以及谷胱甘肽抗氧化系统应答机制，同时对比得出其在不同水平盐胁迫下的基因调控机理。

5. 研究计划与进展

（1）2017.06-2017.09实验材料的培养，样品的采集；（2）2017.10-2017.12 重要基因的筛选与表达分析；（3）2018.01-2018.04克隆基因，构建载体，进行愈伤组织的侵染和番茄的瞬时表达；（4）2018.05 论文撰写。