梨成花相关MYB转录因子的功能验证开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1.1研究意义梨是我国第三大水果，面积和产量均位居世界首位。

梨成花是果实形成的基础，因此阐明梨成花调控的分子机制，对于调控花期、提高产量和品质具有重要的理论和实践意义[1-2]。

近年来，果树成花研究取得了较大的进展[3]，但是对于涉及果树成花的众多基因功能尚不清楚。

2. 研究的基本内容和问题

2.1研究目标使用农杆菌介导的方法，将空载对照（pcambia1300-35s:gfp）和pcambia1300-35s:pblcl1-gfp的表达载体转入本生烟（nicotiana benthamiana），并筛选获得阳性植株。

并以该转基因材料分析pblcl1基因在成花方面的功能。

2.2 研究内容（1）本生烟的遗传转化（2）转基因烟草的鉴定筛选（3）转基因烟草开花时间表型的分析2.3 拟解决的关键问题（1）pblcl1、pblcl4和pblcl6基因过表达对植株开花时间的影响

3. 研究的方法与方案

3.1研究方法：1.烟草遗传转化（1）农杆菌gv3101的培养：使用yeb培养基，28℃，200rpm震荡培养过夜，使用离心机5000g，10分钟室温离心，收集菌体。

（2）农杆菌诱导活化：使用诱导活化缓冲液（10 mmol/l mes-koh ph5.7，10 mmol/l mgcl2，200 μmmol/l 乙酰丁香酮）重悬菌液，并调节od600=1.0，缓慢振荡培养过夜。

（3）侵染烟草叶片：使用1ml注射器在烟草叶片背面注射菌液，直至叶片被完全浸润。

4. 研究创新点

(1)梨生物钟基因及作用国内外尚未见报道，其调节成花及对外界逆境的响应过程，需要进一步的实验研究。

(2) 梨的遗传转化体系尚不成熟，且从组培苗到开花需要数年的时间，因此多采用异源表达的方式进行基因功能验证。

本研究利用梨中克隆得到的基因转入本生烟的方式进行功能验证，周期时间短，可操作性强。

5. 研究计划与进展

(1)2017.09前已完成的工作：查阅相关文献，种植本生烟野生型材料。

本生烟的遗传转化，获得转基因阳性苗及转基因种子。

(2)2017.09-2018.01：种植转基因本生烟，观察统计分析表型，并收取t2代种子。