秋菊ICE2基因的克隆与表达特异性分析开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

意义：探究冻害发生前后，多个低温响应基因在传统秋菊材料中的表达变化规律，从而挖掘影响品种抗冻性差异的关键基因，完善菊花抗寒抗冻性调控网络。

国内外研究概况：植物在低温胁迫下，不同器官内会形成多种多样的代谢产物以适应外部的环境，这些产物的形成是由不同的基因所调控，因此植物抗寒性的形成是多个基因共同控制的结果【1】。

冷诱导基因分为两类：一类是编码调控性蛋白，调控冷信号传导、抗寒基因表达和抗寒蛋白活性的基因，如cbf/dreb、ice基因，它们通过与cor基因启动子区的crt/dre顺式作用元件结合以达到对其相关基因调控的目的【2】；另一类是编码与植物抗寒性的提高直接相关的功能性蛋白基因，如抗冻蛋白基因（afp）【3】。

3. 研究的方法与方案

研究方法：酸性茚三酮测定脯氨酸含量【12】；氮蓝四唑（NBT）显色法测定SOD活性【12】；紫外吸收法测定CAT活性【12】；愈创木酚比色法测定POD活性【12】。

参考文献：【11】李叶云，自然越冬过程中三个茶树品种的生理特性变化及抗寒性评价【12】蔡庆生，植物生理学实验[M]，北京，中国农业大学出版社，2013：54-55取样（匀浆处理）技术路线：↓ ↓反转录取上清液 ↓↓ 荧光定量PCRSOD、POD、CAT、Pro测定

4. 研究创新点

本实验从冻害发生过程入手，动态的分析不同低温响应基因的表达变化规律，挖掘影响品种抗冻性差异的关键基因，为深入研究菊花抗寒抗冻机理奠定基础。

5. 研究计划与进展

探究冻害发生前后，多个低温响应基因在传统秋菊材料中的表达变化规律，从而挖掘影响品种抗冻性差异的关键基因，完善菊花抗寒抗冻性调控网络。