布朗百合愈伤组织的诱导及植株再生体系的建立开题报告

全文总字数：5657字

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

本课题的意义、国内外研究概况、应用前景等（列出主要参考文献）

1.本课题意义

百合是单子叶植物纲百合科（liliaccae）百合属（lilium）的多年生球根草本植物的统称，是世界六大鳞茎植物之一和世界著名的十大切花之一，具有重要的观赏、食用和药用价值，其市场需求与发展前景十分广阔。中国是世界百合资源最丰富的国家，特有种占全球百合资源一半以上。但国内百合资源破坏、流失现象严重，绝大部分资源处于野生状态，资源的开发和利用十分有限，很难满足市场需求（张倩 2016）。目前，国内优质的百合栽种品种都引自国外，种球价格昂贵且质量无法保证且易感染病毒。随着植物生物技术的不断发展，高效遗传转化体系的建立在种质资源保存、辅助育种和品质改良等发面起着越来越重要的作用。良好的百合再生体系是进行遗传转化的基础。因此有必要对百合再生体系以布朗百合为例进行进一步研究（王丽娜 2008）。

2. 研究的基本内容和问题

研究的目标、内容和拟解决的关键问题

1.研究目的

以布朗百合(lilium brownii)无菌苗鳞片为外植体, 探讨不同植物激素组合对愈伤组织诱导、不定芽诱导和生根的影响,进而建立布朗百合高效再生体系。

3. 研究的方法与方案

研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析

1.研究方法无菌苗的获得

1.1无菌苗的获得

取健康的布朗百合球茎，剥去外层鳞片，留用内层鳞片进行外植体消毒，获取无菌苗。

1.2再生体系的建立

植物细胞具有全能性，切取无菌苗靠近鳞片的茎段，放置于不同激素浓度配比的培养基上，由于不同植物激素配比对植物生长有不同影响，且不同植物和品种对植物激素的响应存在差异，从而可以根据茎段的生长情况获得布朗百合再生的最适宜培养基。

2.技术路线

3.实验方案

3.1外植体消毒及无菌苗获得；

3.2不定芽的诱导（设置不同激素的浓度梯度A1 , A2 , A3 , A4），每个处理做三盘重复，每一盘放置10个小茎段）；

芽诱导系数=（产生的不定芽总数/接种的茎段总数）×100%。

3.3不定根的诱导（设置不同激素的浓度梯度B1 , B2 , B3 , B4），每个处理做三盘重复，每一盘放置10个小茎段）；

生根率=（生根的不定芽总数/接种的不定芽总数）×100%; 描述各个培养基培养下的根长势（短或长，细或粗，有无根毛）。

3.4愈伤组织的诱导（设置不同激素的浓度梯度C1 , C2 , C3 , C4），每个处理做三盘重复，每一盘放置10个小茎段）。

愈伤组织的观察分类与等级评价（愈伤组织在不同培养基上状态调整的过程中，选取常见的种愈伤组织的状态：A类：淡黄色愈伤组织，颗粒状，较疏松；B类：黄色愈伤组织，颗粒性中等，较致密；C类：金黄色愈伤组织，颗粒细小，较致密；D类：黄褐色或褐色愈伤组织颗粒性差，呈水渍状。愈伤评价（级：0级：无显著愈伤迹象；1级：有少许愈伤迹象；2级：切口有愈伤颗粒出现；3级：愈伤组织明显；4级：愈伤组织增殖覆盖切口；5级：愈伤组织增殖成小团状；6级：愈伤组织增殖呈团状蓬松；7级：愈伤组织团状蓬松，体积中等；8级：愈伤组织团状蓬松，体积较大）愈伤组织诱导率=(产生愈伤组织的茎段数/接种的茎段总数)×100%。

最终筛选出布朗百合最适宜的诱导愈伤、诱导不定芽、生根培养基, 进而建立布朗百合高效再生体系。

可行性分析

4.1课题组成员具有较丰富的研究经历：

课题负责人熟悉掌握超净工作台和高压灭菌锅的使用方法，在植物组织培养方面有扎实的理论基础和较全面的实验技能和经验。

4.2研究条件良好：

课题组成员具有从事植物组织培养的仪器设备，如超净工作台、高压灭菌锅、人工气候培养箱、光照培养室以及百合种质资源保存中心。因此，已有工作条件可以确保本课题顺利开展。

4. 研究创新点

特色或创新之处

目前，关于百合再生体系的研究有很多，但是关于布朗百合的茎段再生体系和茎段诱导愈伤组织的体系建立的研究还很少。本项目在前人关于其他百合品种再生体系的研究基础上进行设计，旨在得到布朗百合的高效再生体系，为生产和科学研究奠定基础。

5. 研究计划与进展

研究计划及预期进展

1.研究计划

2018年10月-2018年12月