CmBBX8基因的克隆与载体构建开题报告

全文总字数：4111字

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

菊花（chrysanthemum morifolium），原产于中国的菊科菊属多年生宿根性草本花卉，世界“四大切花”之一，占全球切花数量的30%^[1]。菊花拥有数种不同的形态颜色，具有极高的观赏和经济价值，同时兼具食用性以及药用性等多种特性。切花菊在国内外市场需求巨大，是我国主要的出口花卉之一，但由于其是短日照花卉，其花期调控需要耗费大量人力物力，也制约了菊花市场的发展。

转录因子可以激活或抑制其靶基因的表达从而在高等植物生活史中起着重要的调控用。b-box（bbx）蛋白是一类锌指转录因子，其含有具有一个或两个b-box基序的b-box结构域，并且有时还具有cct（constans，co-like和toc1）结构域^[2]。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标：cmbbx8基因的克隆与载体构建

研究内容：对cmbbx8基因进行克隆与载体构建，为之后探索该基因调控植物开花的功能奠定基础

3. 研究的方法与方案

整个实验主要分为以下主要步骤:

一、从转录组中获得中间片段

二、设计简并引物、反转录获得基因、进行基因克隆

4. 研究创新点

BBX基因家族具有32个成员，是控制生长和发育过程的调控网络中的关键因素，包括幼苗的光形态建成，开花的光周期调控，避荫反应以及对生物和非生物胁迫的进程。至今，在拟南芥、棉花、水稻等植物中已有了较为深入的研究，通过探讨CmBBX8在光周期方面对于菊花开花的分子调控机制，为之后探索该基因调控植物开花的功能奠定基础。

5. 研究计划与进展

2019.02——2019.03，从优香材料里提取RNA，获得中间片段→设计简并引物、反转录获得基因→进行基因克隆。

2019.04--2019.05，转摇含有目的基因的菌液及空载菌液，从中提质粒并稀释→加酶切位点后跑胶，胶回收→双酶切后跑胶，胶回收，回收线性载体DNA，插入片段→DNA连接→转化大肠杆菌感受态，挑菌摇菌，菌液检测并测序，后转摇提质粒→构目的载体重组备用