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1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
一、本课题的意义
微型月季有极高的观赏价值,可用于观赏盆栽、庭院装饰、花坛花境装点等。市场上微型月季常被包装成高档礼品花,畅销欧美,仅丹麦一年的微型月季盆花生产量就达到3500万盆。同时,部分富含挥发性物质的微型月季可以用于提取香料、萃取精油等,有很高的经济价值,是重要的花卉资源。
快繁生长周期要远远快于常规扦插繁殖的生长周期。研究微型月季的快速繁殖,有利于提高生产质量、效率,增加经济效益。同时也有利于提高科研效率,缩短耗时,提供大量、优质的品种苗。
2. 研究的基本内容和问题
一、研究目标
建立微型月季组培快繁体系。
二、研究内容
3. 研究的方法与方案
一、研究方法
1.选取外植体:以微型月季带芽茎段作为外植体。
2.消毒处理:将茎段清洗干净去除叶片后,根据芽的分布修剪成2-5cm的茎段,茎段的底端呈45°斜角,上端平整,每段茎上留1-2个腋芽,自来水冲洗1h左右。在无菌工作台内先用无菌水冲洗1min;放入75%酒精中摇晃消毒30s,放入次氯酸钠溶液中消毒;最后再用无菌水冲洗4次,每次1min左右。以上步骤完成后用滤纸将残余的水吸干。
3.培养基培养:按照不同生长阶段准备不同的培养基。
二、技术路线
三、实验方案
(一)实验材料
微型月季“MOSCOW”、“MAASLAND GOLD”、“BERGAMO”的茎段
(二)实验步骤
1.灭菌处理
对不同浓度次氯酸钠不同处理时间灭菌效果研究。
将清水冲洗后代茎段用无菌水冲洗一次后移入75%的酒精中浸泡30s,根据实验计划中次氯酸钠浓度进行梯度实验,每次浸泡8分钟,再用无菌水洗4次,接种在培养基上。根据生长情况找到最佳灭菌的浓度后再用此浓度做时间梯度实验。
次氯酸钠浓度 | 灭菌时间 | 茎段生长情况 |
2% | 5min |
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8min |
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10min |
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5% | 5min |
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8min |
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10min |
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8% | 5min |
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8min |
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10min |
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2.初代培养
探究不同浓度植物生长调节剂(6-BA NAAGA3)对腋芽萌发的影响。
将完成灭菌的茎段接种于初代培养基中,每个培养基接种4个茎段。接种3周后进行观察记录。
表1 不同的初代培养基 | ||||||
处理 | 培养基 | 6-BA/(mg/L) | NAA/(mg/L) | GA/(mg/L) | 生长情况 | 萌芽率 |
C1 | MS | 0.1 | 0.1 | 0.4 |
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C2 | MS | 0.5 | 0.4 |
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C3 | MS | 0.5 | 0.1 | 0.4 |
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C4 | MS | 0.5 | 0.4 |
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C5 | MS | 1.0 | 0.1 | 0.4 |
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|
C6 | MS | 0.5 | 0.4 |
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培养基中琼脂7.8 g/L,蔗糖30g/L,pH = 6.0
3.增殖培养
不同浓度植物生长调节剂(6-BA NAA KT)对腋芽增殖的影响。
表2 不同的增殖培养基 |
| ||||
处理 | 培养基 | 6-BA/(mg/L) | NAA/(mg/L) | KT/(mg/L) | 增殖系数 |
Z1 | MS | 0.5 | 0.0 | 0.0
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Z2 | MS | 1.0 |
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Z3 | MS | 1.5 |
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Z4 | MS | 0.5 | 0.1 |
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Z5 | MS | 1.0 |
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Z6 | MS | 1.5 |
| ||
Z7 | MS | 0.5 | 0.0 | 0.2
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Z8 | MS | 1.0 |
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Z9 | MS | 1.5 |
| ||
Z10 | MS | 0.5 | 0.1 |
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Z11 | MS | 1.0 |
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Z12 | MS | 1.5 |
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培养基中琼脂7.8 g/L,蔗糖30g/L,pH = 6.0培养基中琼脂7.8 g/L,蔗糖30g/L,pH = 6.0
4. 生根培养
不同基本培养基对幼苗生根的影响。
将增殖后的植株移入生根培养基中进行培养,记录生根率。
基本培养基 | IBA | 生根率 |
MS | 0.5 |
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1/2MS | 0.5 |
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5.炼苗
打开瓶盖,在培养室放置5天后观察成活率。
四、可行性分析
微型月季的组培快繁有一定的资料作为实验设计的参考,该实验难点在于无菌操作过程中是否有细菌污染。
其次,因植物的生理特征各有不同,在同等生长环境下也可能会有不同的生长水平。
4. 研究创新点
特色或创新之处
月季的繁殖方法多为嫁接和扦插,国内外在这方面的研究也较为成熟,但并不适用于微型月季的大量繁殖,在工厂化育苗的生产过程中,组织培养可以为微型月季的快繁提供技术支持,但在组培方向上还尚有极大的空间值得探讨。
目前组培各阶段培养基所需物质及大致比例已经可以确定,但是细化到每个品种上又会产生一定的差异,尚没有适用于全部微型月季组培快繁的培养基配方,而针对品种的培养基配方的资料也尚待完善,这一块领域还需要更细致的研究。而且,激素的配比对微型月季的生理有着极大的影响,玻璃化苗就是这一点的体现。褐化问题在目前也只能尽量避免而不能从根本解决。因此,研究不同基因型微型月季的无菌体系建立和丛生芽诱导频技术的差异,可以提高微型月季组织培养效率,节约组培成本,对于早日实现微型月季种苗工厂化生产具有重要意义。5. 研究计划与进展
研究计划及预期进展
前期熟悉实验操作,查找资料。
3月1
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