过量表达DCMYB113促进番茄花青苷的合成开题报告

全文总字数：4502字

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

一、本课题意义、国内外研究概况、应用前景等 (列出主要参考文献)

1.1本课题的意义

番茄(solanum lycopersicum)属于茄科，是一年生草本植物，其营养丰富，含有类胡萝卜素、维生素c、a、e、b₁、糖分，及钾、钙、磷、铁等物质，其中，维生素c的含量尤其高。据测定，每一斤番茄中含有52毫克维生素c[1]。番茄性味甘、酸、微寒，经常多吃能生津止渴、健胃消食。现代医学认为，番茄的酸性是由柠檬酸和苹果酸构成，它有促进唾液和胃液的分泌、帮助消化、增加胃内酵素的作用。中国已经成为番茄酱第一出口大国[2]，而番茄作为番茄酱生产的产体，销售量需求量都比较高。

2. 研究的基本内容和问题

二、研究目标、内容和拟解决的关键问题

2.1研究目标

验证过量dcmyb113是否能促进番茄花青苷合成。

3. 研究的方法与方案

三、研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析

3.1研究方法

提取胡萝卜中的总rna，进行反转录。根据胡萝卜全基因组和转录组数据库中的碱基序列信息设计引物，从‘purple haze’紫胡萝卜中克隆出dcmyb113基因，构建在camv-35s启动子和nos终止子之间，然后分别构建到pcambia2300植物表达载体上，电击转化至根癌农杆菌(agrobacterium tumefaciens) gv3101中。用含有目的基因的农杆菌侵染番茄外植体，在筛选培养基上经过脱分化和再分化获得抗性植株。利用gus染色进一步确认转基因植株后，转入营养土中继续生长。待成熟以后，观察转目的基因的番茄是否产生花青苷而呈紫色。并通过实时荧光定量pcr检测转基因番茄中dcmyb113以及花青苷合成相关结构基因的表达量，与转空载体番茄作比较。

4. 研究创新点

四、特色或创新之处

(1)本项目将通过转基因过量表达验证dcmyb113基因是否能促进番茄花青苷合成。

(2)如果将dcmyb113转入番茄后能使其合成花青苷而呈紫色，这个基因将是一个宝贵的资源。

5. 研究计划与进展

5.1研究计划

2018.03-2018.05基因表达载体的构建：对胡萝卜的总rna进行反转录，克隆目的基因并将其构建在camv-35s启动子和nos终止子之间，然后构建到pcambia2300植物表达载体上，电击转化至根癌农杆菌gv3101中。

2018.06-2018.08番茄遗传转化：番茄种子的洗涤及消毒，放入ms培养基中进行暗培养，待其下胚轴长至一定，转至光培养，幼苗长出完全展开的叶子，子叶切断转至培养基中。通过农杆菌侵染番茄外植体，将目的基因整合到植物染色体dna上。然后在含有卡那霉素的培养基上筛选出抗性植株。