马尾松生长素响应因子(ARF)的克隆、鉴定及表达载体构建开题报告

1. 研究目的与意义

1.马尾松是我国南方重要的经济树种，但由于针叶树种生长周期长、树体高大，由于长期异交，具有高度的杂合性和大量的遗传负荷，使得传统育种周期长，难以适应树木遗传改良的需要。

植物遗传转化技术在多种植物品种改良中的成功应用，为有效的将具有特殊性状的基因引入有价值的针叶树种提供了机会，为培育针叶树新品种开辟了一条经济而有效的途径。

2.生长素响应因子（arf）基因家族参与调节植物的生长发育，侧根的形成，开花调节等过程。

2. 国内外研究现状分析

与作物基因工程相比，林木基因工程研究起步较晚，发展相对落后。

自1986年parson等证实杨树可以进行遗传转化，林木基因工程研究已经取得迅速发展。

已对10科22属35种以上的树种进行了转基因研究，转化研究的领域有抗虫、抗病、抗除草剂、耐盐、耐早等。

3. 研究的基本内容与计划

内容：1.马尾松生长素响应因子ARF家族成员基因的克隆及序列分析 马尾松ARF基因cDNA部分序列的克隆 5′-RACE和3′-RACE 马尾松ARF基因cDNA 全长序列的拼接和分析2.马尾松ARF基因的生物信息学分析 马尾松ARF 基因氨基酸序列同源性比较 系统进化分析3.ARF过表达载体的构建及遗传转化拟南芥 ARF基因过表达载体的构建 ARF基因过表达载体转化拟南芥 观察植物的生长状况，并测其生长量。

4.ARF基因导入马尾松、ARF亚细胞定位研究 ARF-GFP融合蛋白表达载体的构建 融合蛋白表达载体导入马尾松组织 转基因马尾松组织的荧光检测定位时间安排 2014.112014.12查阅文献，准备材料 2014.12－2015.03做预备实验，进行具体试验 2015.02－2015.03数据分析，撰写论文 2015.04－2015.05修改论文，准备答

4. 研究创新点

应用arf-gfp融合蛋白过表达载体的构建，并转入马尾松植株，并优化马尾松转基因体系，为探索马尾松生长素响应因子家族不同成员功能提供了有效途径，同时通过对arf的亚细胞定位研究为了解马尾松生长素响应途径提供了新的技术手段。

gfp用作报告基因有众多优点。

1、灵敏度高，易检测并且是活体检测。