银杏胚乳愈伤组织诱导及褐化研究开题报告

1. 研究目的与意义

银杏（Ginkgo biloba）是中国特有的经济树种，具有极高的经济、生态、观赏和科研的价值。银杏中有黄酮和萜内酯，具有治疗和预防心血管病症、防衰老、延年益寿之功效，受到人们的重视。筛选优良品种建立良种无性系是建立优良无性系的重要一环。但银杏的组织培养技术落后于其他裸子植物，影响了银杏无性繁殖技术的开展。本研究以银杏胚乳为外植体，通过各种条件的调控，研究愈伤组织诱导的条件及其影响其褐化的因素，为银杏组织培养技术进一步成熟提供参考。

2. 国内外研究现状分析

国内：银杏组织培养的研究始于20世纪30年代。1963年，王伏雄等人利用蜂皇浆进行银杏幼胚离体培养的研究。陈耀华等人从1986年11月起，用成熟的银杏种胚为外植体进行培养成苗的试验。徐刚标等报道了银杏愈伤组织诱导率的顺序为：子叶≥胚轴幼叶茎段。于荣敏等对银杏愈伤组织诱导最适培养基进行了研究。陈学森等对继代半年以上的银杏叶片中愈伤组织的检测证明愈伤组织中同样存在黄酮，容易发生褐变。姜玲等研究表明，在芽和幼叶愈伤组织的继代培养基中，添加75mg／LNa₂SO₃，可抑制愈伤组织褐变，促进生长。陈学森等发现0．1％的植酸(肌醇六磷酸酯)或PVP(聚乙烯吡咯烷酮20％)与MES(对氧氮乙环乙烷吡咯烷酮0．5％)可有效控制愈伤组织的褐变。徐刚标等的结果表明，在培养基中加人5．0mg／L维生素C或2000mg／LPVP并调整植物生长调节剂种类，可以消除褐变。

国外：1953年，Tulecke，W．R．用银杏花粉培养出组织。1954年，Tulecke又报道了银杏花粉在无菌条件下的保存和发芽。1956年，Ball，E．开始研究银杏种胚在实验条件下的生长。Camper等研究发现，2，4一D与BA和KT组合诱导产生的愈伤组织中银杏内酯含量高于NAA与BA和KT组合。1991年加拿大的Carrier等人首次肯定了组织培养物中银杏内酯的存在。Archipoff等最早利用银杏叶愈伤组织进行细胞悬浮培养，对培养物进行检测得到两种生物碱。

3. 研究的基本内容与计划

2017-12-1~2018-1-20 银杏愈伤组织诱导

2018-2-20~2018-3-10 银杏叶片或胚、胚乳愈伤组织继代培养，注意观察愈伤组织的形态、颜色变化、褐化等现象，统计愈伤组织诱导率、褐化率。

2018-3-11~2018-4-30 对不同发育时期的银杏褐变和正常的愈伤组织取样，测定sod,pod,cat,apx,gr,pal等酶活性，黄酮、蛋白质、糖等含量，比较差异。

4. 研究创新点

目前，各种外植体在一定条件下已诱导出愈伤组织，但有关银杏胚乳愈伤组织培养研究报道较少。本研究通过对培养基、激素种类和浓度等培养条件进行了初步探讨，以期寻求一种适合银杏愈伤组织诱导的方法 ，为银杏生物技术研究奠定基础。银杏组织培养中，尤其是在愈伤组织的继代培养中，褐变现象特别严重，曾有不少人做过控制褐变的研究．但都投有成功。为此，本研究通过研究不同糖类物质、抗氧化剂、吸附剂以及不同的培养基对银杏组织培养中褐化的影响，旨在探索有效控制揭化现象发生的培养条件。