基于LAMP方法的杨生褐盘二孢菌分子检测研究开题报告

1. 研究目的与意义

杨树（poplar）是世界上分布最广、适应性最强的树种。

杨树天然林分面积约2000多万公顷，天然树种约100多种。

杨树天然树种分布最广的国家有俄罗斯、中国、加拿大、美国、意大利、法国等国。

2. 国内外研究现状分析

病原菌种类不同或在不同品种的杨树上，其危害症状有一定的差异。

杨生盘二孢菌引起的黑斑病在青杨派树种上病斑主要出现在叶背；而在黑杨派和白杨派树种上病斑在叶面和叶背上都有。

病斑褐色，近圆形或角状。

3. 研究的基本内容与计划

1 研究内容2000年，由日本学者notomi等开发了一种新的核酸等温扩增方法，即环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification, lamp），其特点是在等温条件下即可高效、快速、高特异、高灵敏地扩增靶序列，随后研究人员相继建立了针对多种病原性细菌、病毒、真菌、寄生虫等的lamp检测方法，但有关杨盘二孢菌 lamp检测方法的研究尚未见报道。

为此，本研究根据lamp原理，以sybr green i和钙黄绿素为显色剂，建立基于荧光显色的杨盘二孢菌 lamp检测方法，以期为杨盘二孢菌的检测提供有效手段。

2 研究计划（1）杨盘二孢菌dna基因组的提取及纯化（1月01日-1月21日）；（2）lamp检测引物设计（2月17日-2月28日）；（3）摸索优化lamp反应体系（引物混合液、反应缓冲混合液、反应酶混合液、显色剂）（3月1日-3月31日）；（4）验证检测结果（lamp 反应产物的tubidimeter real-time 吸光度鉴定及可视化鉴定）（4月1日-4月15日）；（5）lamp 特异性试验及敏感性检测（4月16日-4月30日）；（6）lamp检测应用性检测（5月1日-5月10日）；（7）准备答辩，完善、提交论文定稿（5月10日-6月9日）。

4. 研究创新点

杨盘二孢菌的检测可以用很多方法，但是存在着许多弊端。

lamp 技术虽然是一种新的核酸扩增技术，但其在分子生物学检测领域的应用非常广泛，相对于现有的其他核酸扩增技术， lamp 具有许多独特的优点，lamp 技术可以在等温条件下实现扩增，不需要进行模板的预变性，减少了pcr 技术升降温带来的影响以及对昂贵、精密实验仪器的要求。

lamp 技术分别使用一对外部引物和一对内部引物，可以识别目的序列上6个不同的区域，对目的序列具有高度的选择性，减少了非靶标序列的影响，因此扩增的特异性非常高。