基于重组酶介导等温扩增-侧流层析技术大豆疫霉检测方法的建立开题报告

1. 研究目的与意义

大豆疫霉病原称大雄疫霉大豆专化型，属鞭毛菌亚门真菌。有性态产生卵孢子。卵孢子球形，壁厚，单生在藏卵器里。在大豆生育期均可发病，出苗前染病引起种子腐烂或死苗。出苗后染病引致根腐或茎腐，造成幼苗萎蔫或死亡。成株染病茎基部变褐腐烂，病部环绕茎蔓延至第10节，下部叶片叶脉间黄化。大豆是中国重要的粮食作物之一，是一种其种子含有丰富植物蛋白质的作物。大豆最常用来做各种豆制品、榨取豆油、酿造酱油和提取蛋白质。但是由于土传的特性和极强的生存能力，这种病原所产生的病害迄今在世界大豆主产区仍呈扩大蔓延的形式。为解决这一形势的发展，我们对此开始研究，并且找出预防此形式的防治方法。

2. 国内外研究现状分析

由疫霉所引起的大豆根腐病和茎腐病最早出现在1948年的美国，公开报道在1955年，随后国外已经开始了半个多世纪的研究，在病原起源、病菌分离技术、生理小种的鉴定、病害的流行、抗性遗传、抗原筛选、抗性机制、病害防治和遗传分化等方面均进行了较深入的研究。我国起步较晚，但也在各方面和研究手段上不断进步，研究范围也在不断扩宽。自90年代初在国内初次报道以来，在大豆疫霉菌的生物特性，国内生理小种的鉴定、分化，药剂筛选，毒力分析，抗性遗传和不通菌株之间的同源性聚类分析等方面的报道逐渐增多。

3. 研究的基本内容与计划

研究内容：

（1）大豆疫霉基因组dna的提取；

（2）特异性靶标的发掘及其引物筛选和重组酶介导等温扩增(recombinase polymerase amlification，rpa)技术实验引物探针设计；

4. 研究创新点

本研究基于大豆疫霉基因组DNA特异性高的区域设计引物和探针，对设计的引物和探针筛选最优组合，用多种疫霉进行对照，分析其特异性，梯度稀释DNA，分析其灵敏度，并与普通PCR进行比较，分析建立的大豆疫霉RPA检测方法的优缺点。