atmcl在植物中的抗病调节作用研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

本实验主要研究ago2互作蛋白在植物抗病中的生物学功能，我们发现在拟南芥上接种病原菌即丁香假单胞番茄致病变种（pseudomonassyringae-pv.tomato,pst）后，ago2与mir393b*结合形成诱导沉默复合体，进而调控植物抗病。我们通过lc-ms/ms和co-ip技术来鉴定与ago2互作的蛋白，在分析了表达谱和测序结果后，挑选了表达差异显著的蛋白amc1(arabidopsistype1metacaspases)来进行后续的研究实验。

1.hutvagnerg,simardmj.(2008).argonauteproteins:keyplayersinrnasilenceingnat.rev.mol.cellbiol9,22-32.

2.jinhl.(2008).endogenoussmallrnasandantibacterialimmunityinplants.febsletters582,2679-84.

2. 研究的基本内容和问题

通过LC-MS/MS和CO-IP技术筛选鉴定与AGO2互作的蛋白，克隆并构建35S:Flag-AMC1和35S:HA-AGO2表达载体，在本氏烟中验证两者的互作。在拟南芥中检测AMC1和AGO2两者表达量的相互关系。确定AMC1和AGO2的互作结构域。检测过表达amc1和amc1突变体的抗病能力。病原菌侵染拟南芥，分析检测AMC1表达量的变化及对AMC1和AGO2两者互作的影响。最后检测AMC1对AGO2结合的小RNA表达量的影响。

3. 研究的方法与方案

通过LC-MS/MS和CO-IP技术筛选鉴定与AGO2互作的蛋白，克隆并构建35S:Flag-AMC1和35S:HA-AGO2表达载体，在本氏烟中验证两者的互作。在拟南芥中检测AMC1和AGO2两者表达量的相互关系。确定AMC1和AGO2的互作结构域。检测过表达amc1和amc1突变体的抗病能力。病原菌侵染拟南芥，分析检测AMC1表达量的变化及对AMC1和AGO2两者互作的影响。最后检测AMC1对AGO2结合的小RNA表达量的影响。

4. 研究创新点

本实验主要研究AGO2互作蛋白在植物抗病中的生物学功能，我们发现在拟南芥上接种病原菌即丁香假单胞番茄致病变种（Pseudomonassyringae-pv.tomato,Pst）后，AGO2与miR393b*结合形成诱导沉默复合体，进而调控植物抗病。我们通过LC-MS/MS和CO-IP技术来鉴定与AGO2互作的蛋白，在分析了表达谱和测序结果后，挑选了表达差异显著的蛋白AMC1(Arabidopsistype1metacaspases)来进行后续的研究实验。

5. 研究计划与进展

研究材料：拟南芥、本氏烟

技术路线：

1）目的基因amc1的克隆