梯度稀释法分离蚓粪中四环素及铜抗性菌株的研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

（1）本课题的意义随着畜牧业及饲料业的发展，畜牧养殖中四环素类、大环内酯类、青霉素类等抗生素作为饲料添加剂的应用越来越广泛[1]。

此外，为了实现增产，铜也是畜牧养殖常用的饲料添加剂，在畜禽粪肥中含量较高，造成了养殖业的重金属污染问题，罗义等[2]已经在养殖动物的粪便中发现高浓度的抗生素和重金属。

畜禽粪便已经是环境中抗生素抗性基因储库的扩大的主要来源。

2. 研究的基本内容和问题

（1）研究目标四环素和重金属铜作为重要的饲料添加剂，为促进畜禽生长而大量用于畜禽养殖业。

本实验结果证明抗生素和重金属铜诱导土壤中抗生素抗性基因产生，且对抗生素抗性基因在环境中的存在和传播有协同促进作用。

研究以四环素与重金属协同作用下产生的抗性细菌有助于我们进一步了解抗生素与重金属传播机制，并为规范畜禽业中抗生素及重金属的使用提供理论和数据支撑。

3. 研究的方法与方案

（1）研究方法 1.1蚓粪中单菌落筛选1.1.1 培养基配制成分（每升培养基中）：10g氯化钠(nacl)，10g胰蛋白胨，5g酵母提取物，15g琼脂粉 配制方法：　　（1）分别称取所需量的氯化钠、胰蛋白胨、和酵母提取物，置于烧杯中。

（2）加一定量蒸馏水于烧杯中，用玻璃棒搅拌混匀。

（3）向烧杯中分别加入5μg/ml、10μg/ml、100μg/ml、250μg/ml、一定量的cuso4粉末。

4. 研究创新点

特色或创新之处1. 以蚓粪作为研究对象，系统分析其中四环素和重金属铜抗性基因；2. 进行16s rRNA测序3. 扫描电镜拍摄及系统发育树的制作

5. 研究计划与进展

研究计划及预期进展2018.02.232018.03.11 查阅相关文献，确定实验方案，熟悉实验室各种技能2018.03.122018.03.19 筛选蚓粪中的四环素和铜的抗性基因2018.03.202018.04.20 菌落DNA提取、PCR扩增、16s rRNA测序2018.04.202018.04.30 系统发育树制作、扫描电镜拍摄2018.05.01结题前统计实验数据，撰写毕业论文