细菌sRNA Bas01对芽孢生成的影响开题报告

1. 研究目的与意义

解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）FZB42是一株背景研究较为深入的革兰氏阳性芽孢杆菌，该菌株具有显著的植物促生作用，以及拮抗病原真菌的效果；此外亦有报道，FZB4能够抑制秀丽隐杆线虫的生长。松材线虫是导致我国松树林重大病害----松材线虫病的病原，本课题将测试FZB42对松材线虫的杀伤效果，进而探究及其潜在的杀伤机制，为解决松材线虫病问题提供一种新的可能途径。

2. 国内外研究现状分析

目前松材线虫的天敌研究较多的主要是真菌。捕食松材线虫的真菌捕捉线虫的方式是利用环捕捉器套住松材线虫,从而杀死线虫并在虫体内繁殖;另一方式是菌网粘缠线虫,从而致死线虫,吸收其营养并在其体内繁殖。内寄生真菌的孢子附着在松材线虫体表，并在萌发时侵入虫体内繁殖并杀死线虫，一般捕捉越冬后耐久型幼虫和分散型幼虫，此类幼虫在天牛化蛹时聚集在天牛体表和体内，随着天牛羽化被带出病树体，再通过天牛取食或产卵传播到健康松木上。目前研究发评估的产毒真菌包括336株陆生真菌、119株水生真菌，都对松材线虫的具毒杀活性，其中13个属的大多数菌株对松材线虫有毒杀活性,是防治松材线虫较有前景的产毒菌株。

通过对大量抗生素的检测发现粘菌素a、多粘菌素b1、短杆菌肽s、干蠕孢菌素、星形孢菌素、世田霉素、抗霉素a和阿维菌素对拟松材线虫表现出较强的毒杀作用，从1万株的放线菌菌株培养物中也筛选获得天坛菌素a、天坛菌素b、新金丝菌素、杀粘虫菌素、粉蝶霉素a、抗霉素a、金链菌素等7个化合物具有较强的活性。有一些蜱螨在松墨天牛的蛹室里,附着在天牛老熟幼虫、蛹和成虫的虫体上,靠捕食蛹室内和虫体上的松材线虫发育繁殖，包括双革螨科、厉螨科和蠊螨科的某些种。

马尾松、北美乔松和长叶松是对松材线虫有抗性的松树品种，有学者从树体中分离出了一些对松材线虫有毒杀活性的化合物，包括赤松素、短叶松素、松属素、methyl ferulate和松脂酚等。目前有7种豆科植物的抽提物对松材线虫有毒杀活性。n-甲基金雀花碱、臭豆碱、金雀花碱、烟碱、苦参碱、槐果碱和槐胺碱对松材线虫具有较强的杀线虫活性。菊科、蔷薇科、五加科和大戟科这4科中有11种植物的甲醇抽提液对松材线虫表现出毒杀活性。

3. 研究的基本内容与计划

供试菌株在培养基上生长24h后，收集至50ml离心管中，加入30ml乙腈与水的混合液，最后加入浓度为0.1%的甲酸，离心后去上清再使用旋转蒸发器蒸干，使用时加入甲醇溶解到需要的浓度即可。

供试线虫使用同步培养的无菌松材线虫，收集一定数量的虫卵，经过一定时间合适条件的培养，l4的松材线虫即为供试松材线虫。无菌性的检测使用lb培养基。

使用不同稀释倍数的抽提液对线虫的生物活性测定，吸取一定体积的抽提液加入到有线虫悬浊液的24孔细胞培养板中混匀，另外一组加入清水作为对照，28℃放置一定时间后显微镜观察并计算校正死亡率。在显微镜下观察时，线虫没有运动且用针刺法和热刺法都没有反应时确认为死亡。、

4. 研究创新点

松材线虫病又称松材萎蔫病，是松树的一种毁灭性病害，其主要传播媒介是松墨天牛，目前有关松墨天牛的生物防治研究和利用的报道较多,但直接对松材线虫生物防治研究重视的程度还不够。本课题将测试解淀粉芽孢杆菌FZB42对松材线虫的杀伤效果，进而探究及其潜在的杀伤机制，为解决松材线虫病问题提供一种新的可能途径。

本课题使用的供试线虫为同步培养的无菌松材线虫，消除了其他微生物对松材线虫的潜在影响以及虫龄对线虫死亡率的影响。