樟疫霉Avh122、Avh133效应蛋白功能的初步研究开题报告

1. 研究目的与意义

本研究借助农杆菌介导的pvx病毒表达系统，对樟疫霉中rxlr效应子avh122和avh133的生物学功能进行了初步的功能分析。

在本氏烟上瞬时表达这2个樟疫霉rxlr家族效应子，并验证了其是否对老鼠细胞凋亡前体蛋白bax或者激发子inf1引起的植物细胞死亡具有抑制作用，或者能够激发植物的免疫反应。

同时进一步系统比较分析w-motif所含氨基酸与抑制bax触发的pcd（bt-pcd）之间的关系，鉴定了与之相关的氨基酸位点，从而对了解寄主与樟疫霉在分子水平上的互作机理产生重要意义。

2. 国内外研究现状分析

国内外有关研究针对樟疫霉的研究，国外对樟科植物造成危害的研究较多，而国内对其研究较少。

黄世钰（1984）对樟疫霉作出了简介，樟疫霉又称褐疫霉、肉桂疫霉,属于卵菌纲、霜霉目、腐霉科、疫霉属中的一种藻菌,可引起林木或农作物腐烂枯死.澳大利亚、美国、日本、英国、马来西亚以及我国的台湾省等热带和亚热带地区均有分布,在国外是一种常见病害.可侵染桉树、山茶、樟树、栗、金鸡纳树、石楠、橡、杉、柏、松等林木,梨、桃、李、菠萝等果树及瓜、椒等农作物达9百多种,是植病中一种重要病原菌.我所于1979年开始该菌研究,除发现侵害刺槐引起干腐外,国内尚少侵害其他植物的报道. 周新根、俞美莲、朱宗源、汪树俊（1997）应用诱饵分离技术对上海地区两个自然发病土壤中樟疫霉（phytophthoracinnamomi）的密度进行了为期25个月的测定．结果表明．樟疫霉在两个不同寄主土壤中呈季节性规律变化，夏、秋季最高，其带菌土样率和回收菌株数分别高达44％和83株；冬季最低，在土壤中检测不到．春季开始回升．该菌密度与某些生态因子的回归分析结果表明．它主要与土壤温度呈显著相关（p＜0.05）．最适土温25℃左右．小于10℃时检测不到。

该菌密度在土壤中的季节变化与寄生植物病害的发生存在着内在联系．该菌密度越高，寄主病害越重。

3. 研究的基本内容与计划

研究内容:1.对樟疫霉中RxLR效应子Avh122和Avh133的生物学功能进行了初步的功能分析2.验证是否对老鼠细胞凋亡前体蛋白bax或者激发子INF1引起的植物细胞死亡具有抑制作用3.研究寄主与樟疫霉在分子水平上的互作机理。

具体时间安排：2016.11.20―2016.12.30：查阅文献，做好预备实验；2017.1.1－2017.2.20：提取樟疫霉菌丝基因组DNA、RNA，合成cDNA；效应子Avh122和Avh133的生物信息学分析；效应子Avh122和Avh133基因克隆及重组质粒的构建；2017.2.21－2017.4.20：农杆菌GV3101感受态细胞的制备和转化方法；利用农杆菌介导的PVX病毒表达系统在本氏烟上瞬时表达樟疫霉RxLR效应子Avh122和Avh133；鉴定是否抑制Bax诱导HR或者抑制INF1引起的植物细胞死亡；2017.4.21－2017.6.5：效应子Avh122和Avh133的转录水平分析,撰写毕业论文。

4. 研究创新点

前期已经获得国家自然基金和博士后科学基金的资助。

南京林业大学森林保护学科是国家级重点学科。

目前，学科拥有可供本研究所需的植物病理学实验室、分子植物病理学实验室、组织培养室、植物生长室、组织病理学等实验室，实验室具备本项目中需要的仪器设备，拥有从事植物病理学和分子生物学的常规仪器。