番茄根际拮抗菌的分离筛选及其对土传青枯病的防控效果研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

番茄是全世界栽培最为普遍的果菜之一。

我国为主要生产国之一，各地普遍种植，有大面积温室、塑料大棚及其它保护地设施栽培，栽培面积仍在继续扩大。

近年来，随着种植面积的扩大和种植年限的延长，栽培品种单一、品种结构不合理、栽培模式和栽培管理技术不当，番茄病害的发生非常普遍。

2. 研究的基本内容和问题

（一）研究目标① 探明番茄连作土传青枯病拮抗菌的有机营养谱；② 获得生防效率稳定的防控番茄青枯病的生物基质。

（二）研究内容① 番茄连作土传青枯病拮抗菌的分离筛选从南京江宁麒麟镇番茄连作土传青枯病发病率≥80%的田块中寻找没有发病的健康植株，从其根际土壤和根系内分离筛选能拮抗番茄连作土传青枯病病原菌的功能性微生物菌种。

② 拮抗番茄连作土传青枯病的拮抗菌的有机营养组学研究通过biolog、48空微孔板等方法研究获得不同拮抗微生物菌株的有机碳营养特征；通过48空微孔板筛选获得不同拮抗菌的有机氮营养组分特征。

3. 研究的方法与方案

（一）研究方法（1）番茄青枯病拮抗菌的初筛采用平板对峙实验法；（2）番茄青枯病拮抗菌的复筛采用盆栽土培生物试验法；（3）番茄青枯病拮抗菌的鉴定采用16s rrna基因测序法；（4）番茄青枯病拮抗菌有机营养组学研究采用biolog法和48孔微孔板法；（5）拮抗菌有机营养吸附基质的配伍采用筛选法；（6）高效防控番茄青枯病的生物功能基质的施用效果研究采用盆栽土培试验法。

（二）技术路线 番茄青枯病拮抗菌的功能基质研究（三）实验方案1、室内筛选拮抗菌1.1青枯菌拮抗菌的筛选（1）青枯菌菌悬液的制备：用接种环挑取青枯菌ql-rs1115菌体划线于tzc平板上，28c培养36 h后，挑取流动性强的菌株接种到cpg液体培养基中，28c振荡（170 rpm）培养48 h，获得青枯菌发酵液（5.0 109 cfu/ml）。

发酵液8, 000 rpm离心10 min，弃去上清，菌体用0.8%的生理盐水重悬，根据试验要求调整菌液浓度。

4. 研究创新点

本课题的创新之处在于揭示拮抗微生物菌株的有机营养组学，并根据拮抗菌的有机氮碳营养谱利用畜禽粪便、秸秆、中药渣、菜粕等堆肥配伍生产拮抗番茄青枯病的功能基质，使番茄青枯病的生物防治从幼苗开始即形成防御体系，能提高生防效果。

5. 研究计划与进展

课题研究计划及预期进展2015年05月至2015年08月拮抗番茄青枯病微生物菌株的分离、筛选、复筛；2015年09月至2015年11月拮抗番茄青枯病微生物菌株的有机营养组学研究，高效拮抗微生物菌株间的配伍；2015年12月至2016年01月不同固体废弃物堆肥的复配研究，拮抗番茄青枯病微生物功能基质固体二次发酵研究；2016年03月至2016年05月 盆栽试验研究使用基质的生防效果；课题总结、验收。

预期研究成果（1）提供能拮抗番茄连作土传青枯病微生物菌株10-12株，并对其中主要菌株进行鉴定，获得其生理生化性状；（2）揭示拮抗番茄连作土传青枯病微生物菌株的有机营养组学特征；（3）获得以畜禽粪便堆肥、秸秆、中药渣、菜粕等固体废弃物堆肥复配组合制取生物功能基质的复合吸附基质1个；（4）提供拮抗番茄青枯病生物功能基质产品1个。