1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
研究意义:番茄青枯病是由茄科劳尔氏菌(ralstonia solanacearum)引起的一种细菌性维管束病害,在我国长江以南各地区尤其是华南地区发病严重。
青枯病为土传病害、病原菌变异性强、寄主范围广,因而防治较为困难,农药防治效果甚微。
噬菌体广泛存在于环境中,其中裂解性噬菌体能够专一性裂解细菌,并在特异性宿主菌细胞内呈指数增殖,产生的子代噬菌体进一步侵染新的宿主菌。
2. 研究的基本内容和问题
目标:从番茄青枯病的发病植株的根际土壤中,分离筛选出高效裂解青枯菌的噬菌体,并以此为材料研究其生物学特性以及防控番茄青枯病的效率。
内容:1. 筛选纯化出一株高效的青枯菌专性噬菌体;2. 研究该噬菌体的生物学特性;3. 研究该噬菌体室内抑菌能力及稳定性;4. 研究该噬菌体的盆栽应用效果。
拟解决的关键问题:1.青枯病植株根际土壤中的青枯菌专性噬菌体的分离筛选;2.如何提高噬菌体对青枯病的防控效率。
3. 研究的方法与方案
研究方法:(1)青枯菌特异性噬菌体的筛选以本实验室保存的ralstonia solanacearum ql-rs1115(分离自南京麒麟镇)模式青枯菌研究材料,从青枯病发病区域采集番茄植株根际样品,用于分离高效侵染青枯菌ql-rs1115的噬菌体。
具体方法如下:将采集的土样按每90 ml sm悬浮液加10 g土样的比例加入三角瓶中振荡过夜,取出后静置。
将土壤悬浮液经0.22 μm滤膜过滤后取5 ml 加入对数期的r. solanacearum 菌液中振荡培养12 h,将共培养液用0.22 μm滤膜过滤后即为噬菌体原液。
4. 研究创新点
随着抗生素耐药性的发展,噬菌体疗法具有宿主特异性、高效裂解及快速增殖且对环境扰动小等优势。
本研究利用分离自根际土壤的噬菌体进行土传青枯病的防治,结合室内孔板实验和温室盆栽实验验证该噬菌体的防控效果,具有一定的创新性。
5. 研究计划与进展
2018年3月初-3月底 青枯菌专性噬菌体的分离筛选2018年4月初-4月中 噬菌体抵御青枯菌入侵能力的鉴定2018年4月中-4月底 噬菌体防控青枯菌应用效果研究2018年4月底-5月中 数据分析,撰写毕业论文
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