松材线虫与拟松材线虫杂种的遗传学标记开题报告

1. 研究目的与意义

松材线虫是一种松树毁灭性病害松材线虫病的病原物。拟松材线虫是一个在寄主植物、形态、生理生化等方面与松材线虫极为相似的伞滑刃属的一个种。以前一直认为拟松材线虫没有致病性或致病性极微弱，但是近几年，不少学者分别发表文章认为某些拟松材线虫群体对黑松的幼苗有一定的致病性。在自然状态下，松材线虫与拟松材线虫是否存在杂交以及杂交种是否造成松树的生长衰弱或死亡一直是一个值得探讨的科学问题。因此研究与开发杂交种的遗传学标记有利于检验自然状态下是否存在松材线虫与拟松材线虫的杂交种，从而进一步来探讨生产上松树不明原因的死亡现象。

2. 国内外研究现状分析

季宏铁(2004)在进行松材线虫与拟松材线虫的生物学杂交研究时，提取种内和种间杂交后代基因组dna，使用its区的一对通用引物pcr扩增工its区，用五种内切酶对pcr产物进行酶切处理，将所得的酶切图谱与其两亲本比较，结果显示:亚洲型与欧洲型拟松材线虫种内杂交后代its区用rsal和haeiii两种内切酶的酶切，杂交后代的酶切图谱是一个亚洲型与欧洲型拟松材线虫的酶切混合图谱;而松材线虫与拟松材线虫种间杂交后代的工ts一rflp则较复杂，随着培养代数的增多，其酶切图谱有一定的变化。但是总体来说，无论是种内杂交还是种间杂交，其基因组dna包含父本和母本的成分。

韩正敏等（2010）在进行松材线虫5虫株与拟松材线虫1虫株进行杂交结果显示:松材线虫各虫株均能与拟松材线虫杂交且杂交率均较高，但杂交后代中普遍存在线虫死亡率较高的现象。用杂交后代线虫与未杂交亲本线虫分别接种2年生马尾松苗，结果表明杂交后代线虫对接种松苗的致病性小于其未杂交亲本线虫，从接种后萎蔫的松苗中再分离线虫，杂交后代线虫再分离数远少于亲本线虫数。

riga等(1992)人将松材线虫 与拟松材线虫种内和种间杂交后代基因组dna利用hindiii酶切后，用标记的核糖体基因探针杂交，其结果显示，来源于法国和日本的拟松材线虫种内杂交，杂交后代的基因组dna主要来源于法国型拟松材线虫群体，但是却存在着一条日本与法国的拟松材线虫群体的共享条带，因此其后代基因组不分可能来源于亚洲群体。种间杂交，杂交后代继承了来源于法国的拟松材线虫和北美的松材线虫基因组dna。并且亚洲的拟松材线虫与松材线虫杂交后代的基因组来源于松材线虫。

3. 研究的基本内容与计划

1、2011.02.16―2011.03.08：查阅文献，做预备实验；

2、2011.03.09－2011.03.22：线虫收集、培养；

3、2011.03.23－2011.04.10：线虫杂交与形态观察；

4. 研究创新点

1、采用ITS-RFLP方法分析多种松树寄生线虫，从而构建松树寄生线虫酶切图谱库，从而知道了多种杂交组合后代基因的组成情况。