松材线虫14-3-3基因克隆与原核表达开题报告

1. 研究目的与意义

松材线虫是我国一种重要的林业外来有害生物，对我国的广大的松林资源和自然景观资源造成严重破坏。

14-3-3蛋白是一种酸性可溶性蛋白，自然状态下主要以同源或异源二聚体形式存在，可以同时与两个靶蛋白或者与一个靶蛋白的两个结构域相互作用，通过与靶蛋白上的一小段共有序列的磷酸化丝氨酸／苏氨酸残基结合来发挥其调控功能。

本研究将在前期获得松材线虫14-3-3蛋白的基础上，进一步揭示该基因在基因组中的结构特征，并进行相关的生物信息学分析。

2. 国内外研究现状分析

目前,在14-3-3 蛋白的结构研究方面，Cooper等（2003）已对拟南芥14-3-3家族成员的一级结构进行了分析。在水稻和拟南芥等植物14-3-3蛋白的进化方面，有研究表明ε样14-3-3蛋白分布在同一分支，非ε样蛋白则处于不同分支，表明非ε样蛋白经历了较大的变异。而在14-3-3 蛋白的功能学研究方面，14-3-3蛋白具有高度保守性，在大多数生物物种中均是由多基因编码。同时有研究表明，不同14-3-3蛋白对靶蛋白的调控有较强的特异性。

综上所述，尽管关于14-3-3蛋白在其他物种中有了大量的研究，但目前为止，在松材线虫中还没有关于14-3-3蛋白的报道。不过随着科学技术的发展，我们已经有技术和能力对松材线虫14-3-3蛋白进行研究。鉴于该基因对蛋白活性的调节，对探讨物种对生物或非生物的胁迫的响应机制，特别是入侵种对侵入地的生态环境的适应机制等方面具有重要作用，因此开展该基因的克隆和分析具有重要意义。

3. 研究的基本内容与计划

（1）松材线虫14-3-3基因全长cdna克隆

（2）松材线虫14-3-3基因在基因组中的结构特征分析

（3）松材线虫14-3-3基因原核表达载体构建与体外表达

（4）用凝胶电泳谱带以及基因的测序的方法采集和处理数据

4. 研究创新点

首次对松材线虫的14-3-3蛋白进行基因克隆和原核表达研究