解淀粉芽孢杆菌sRNA缺失突变株的构建开题报告

1. 研究目的与意义

植物根际促生细菌（plantgrowth-promotingrhizobacteria，PGPR）是指生活在植物根系周围，对植物的生长或者产品质量的提高，具有促进作用的一大类细菌。解淀粉芽孢杆菌（Bacillusamyloliquefaciens）FZB42是一株背景研究较为深入的革兰氏阳性PGPR。前期研究在FZB42中发现了一个新的非编码sRNA，该sRNA受到植物根系分泌物的显著调控，暗示着该sRNA积极参与了植物-微生物相互作用。PGPR与植物的相互作用关系是长期以来微生物研究的焦点领域之一，同时，PGPR也是开发生物农药，微生物肥料的主要菌种来源。因此对该sRNA进行缺失突变并进而研究其功能，对于深入了解PGPR的功能和作用机制有重要意义。

2. 国内外研究现状分析

近年对解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)的研究与探索越来越多,由于其自身具有广泛地抑制真菌与细菌的能力,因而成为具有生物农药开发潜力的微生物。尽管早在1970年代，就发现了sRNA在细菌中的存在，但是直到刚刚过去的六、七年，才真正掀起了对细菌sRNA的研究热潮，对它们的功能和作用机制也有了比较深入的了解[4-8]；特别是近些年，随着细菌全基因组序列的不断公布，越来越多的sRNA首先被用生物信息学的方法预测出来，进而被实验所证实.总体而言，sRNA仍是一个有待深入探索的神秘世界，特别是其对细菌生长，代谢的调节作用，对致病菌毒力和致病机理的影响，是当今研究的一个热点问题不过，目前大部分对sRNA的研究都集中于革兰氏阴性（G―）细菌（例如大肠杆菌和沙门氏菌），而对革兰氏阳性（G ）细菌的sRNA研究则比较少

3. 研究的基本内容与计划

1前言：与本课题有关的国内外最新研究进展，立题意义。

2方案拟定：科学合理，具有可行性。论文时间安排：（1）2012.2.17―2012.2.27：（1）2012.2.17―2012.2.27：阅读文献。熟悉掌握以下概念，基本操作流程，和研究意义：解淀粉酶芽孢杆菌，pcr，srna，酶切，酶联，基因工程，pcr，化学转化，pcr，16sdna（2）2012.3.1―2012.5.15：对在解淀粉芽孢杆菌bacillusamyloliquefaciensfzb42中发现的srna进行srna缺失突变株的构建；（3）2012.5.16―2012.5.31：整理试验数据，撰写毕业论文，准备答辩。

3实验数据采集与处理：野生菌株，以及候选基因由教师提供。实习学生负责总rna的提取，real-timepcr的验证。4结果与讨论：对srna进行pcr,酶切酶连等基因工程操作的基本流程从而构建srna缺失突变菌株。5附表、图和照片：三线表。表图中数据要有标准误。照片中有比例尺。照片清晰。

4. 研究创新点

解淀粉芽孢杆菌FZB42是一株背景研究较为深入的革兰氏阳性PGPR。前期研究在FZB42中发现了一个新的非编码sRNA，该sRNA受到植物根系分泌物的显著调控，暗示着该sRNA积极参与了植物-微生物相互作用。对该sRNA进行缺失突变并进而研究其功能，对于深入了解PGPR的功能和作用机制有重要意义。