昆虫基因组DNA提取方法的比较研究开题报告

1. 研究目的与意义

随着有害生物的猖獗以及在各地甚至各国传播,对其进行准确的鉴定及快速的处理成为了出入境检疫部门的首要任务。

目前,形态特征鉴定是检疫系统常用的方法,然而,形态学鉴定主要以成虫为对象,并且要求昆虫形态较完整以及保存时间较短。

但是，截获的昆虫中有相当一部分为幼虫、部分破碎的成虫,或者保存时间过长,使得形态学鉴定难以实现。

2. 国内外研究现状分析

国内学者曾研究了一种简单快速地提取鞘翅目昆虫核酸的方法。以异色瓢虫和青杨脊虎天牛为试验材料采用改良的CTAB法分别提取这2种昆虫不同部位的核酸。电泳检测和紫外分光光度分析结果表明改良的CTAB法提取的DNA和RNA具有较高的质量和纯度其A260/A280分别为1.7~1.9和1.9~2.0。RT-PCR和ISSR-PCR分析结果表明利用该方法提取的总RNA和总DNA可用于基因克隆和分子标记等下游技术实验。

鞘翅目昆虫富含几丁质的外壳，常规方法难以获得高质量的RNA。有人以鞘翅目拟步甲科昆虫小胸鳖甲（Microdera punctipennis）为例，采用TRIzol试剂提取分离总RNA，方法略有改进，并对总RNA的电泳谱带特征进行鉴定。利用该方法从小胸鳖甲成虫中所获得的总RNA纯度较高完整性好，证明提取的总RNA可满足RT-PCR等多种后续实验。琼脂糖凝胶电泳分析表明，其总RNA电泳谱带主要以18S带为主，28S则很弱。该提取方法对其他荒漠拟步甲科昆虫，尤其是含几丁质外壳的甲虫总RNA提取具有指导作用，小胸鳖甲总RAN的电泳谱带与哺乳动物肿瘤细胞的不同。

Black等采用了匀浆法提取蚜虫基因 DNA并用于RAPD 扩增 ,取得了很好的效果。田英芳等参照蝗虫基因组DNA提取方法 ,综合了其他方法的优点,建立了一种简易的昆虫基因组DNA 的提取方法；杨效文在烟蚜 (Myzus persicae)的研究中采用加入两种提取液的方法；安瑞生等对这种方法作了改进,以后的蚜虫研究人员大多采用这种方法提取蚜虫基因组DNA。杨子祥等在五倍子蚜虫研究中尝试和比较了Black、田英芳和杨效文等学者的提取方法,并以田英芳的方法为基础,对部分步骤作了改进,能够快速、有效地提取单头蚜虫的基因组 DNA ,满足RAPD分子标记和DNA序列测定等研究的需要。本方法也适用于同翅目其他微小昆虫 (如介壳虫) 基因组DNA 的提取。

3. 研究的基本内容与计划

研究内容:

1、不同方法提取昆虫基因组dna的效果比较；

2、不同方法提取不同组织dna的效果比较；

4. 研究创新点

目前，形态特征鉴定是检疫系统常用的方法，但这局限于对于完整新鲜昆虫样本的鉴定。

本项研究分别使用不同方法提取单头标本、肌肉组织和多年液浸标本的基因组DNA，进行效果比较，以期筛选出适宜昆虫DNA提取的方法，为昆虫的分子快速鉴定奠定基础。