嗜麦芽窄食单胞菌M8菌株的荧光标记开题报告

1. 研究目的与意义

目的：本实验室从美国松材线虫体表分离了一株嗜麦芽窄食单胞菌，证明了该菌有致病性弱，繁殖能力强等特点，并能够大大降低松树萎蔫病的发病机率，但对于该菌株在自然界的繁殖和生存能力了解很少。

生防菌在自然界的生存和繁殖能力决定了该菌生防能力的持续性，而最终决定了防治效果，决定了该技术的成败。

本研究拟通过对该菌株进行荧光标记，通过荧光标记，使mg8菌在自然条件下的繁殖和扩散情况的追踪成为可能，为松材线虫病的生物防治提供基础。

2. 国内外研究现状分析

1、嗜麦芽窄食单胞菌的一般特性窄食单胞菌属连同黄单胞菌属属于变形菌门的γ-β亚纲。

1981年，嗜麦芽窄食单胞菌最初被被描述为是麦芽假单胞菌，后来重新命名为嗜麦芽黄单胞菌，最后才被命名为嗜麦芽窄食单胞菌。

嗜麦芽窄食单胞菌广泛存在于大自然以及人类生存环境中。

3. 研究的基本内容与计划

研究内容：1.嗜麦芽窄食单胞菌药敏测定及转化体系的探索 2.gfp表达载体的构建及其在mg8嗜麦芽窄食单胞菌中的整合表达研究计划：1、mg8嗜麦芽窄食单胞菌药敏测定及转化体系条件的优化（1）mg8嗜麦芽窄食单胞菌的药敏测定测定细菌的最低抑菌浓度（mic）。

mg8嗜麦芽窄食单胞菌具有多种天然抗药机制，在进行转化的试验中使用对多种抗生素不敏感，利用抗生素筛选转化子较为困难，获得的转化子的效率较低，在同一株菌落中指存在少量转化子，因此利用合适的抗生素进行筛选才能够获得较好的筛选结果。

试验方法 利用含有不同浓度梯度的抗生素培养基进行筛选。

4. 研究创新点

1、嗜麦芽窄食单胞菌的生理生化性质特殊，具有对抗生素不敏感、细胞表面具有荚膜等抗逆物质，使得转化和筛选的过程变得繁琐、耗时；关于嗜麦芽窄食单胞菌工程菌的制作报道非常少，相关信息有限。

2、对嗜麦芽窄食单胞菌进行基因工程改造的报道在国内外基本没有，因此该试验较为新颖；同时为嗜麦芽窄食单胞菌潜在功能的开发提供重要依据。