琅琊榆根际AMF分离鉴定开题报告

1. 研究目的与意义

琅琊榆(ulmus chenmoui cheng)是我国特有树种, 榆科榆属落叶乔木，由于近年的旅游开发强度过大, 导致琅琊榆原生生境破碎, 使天然分布的琅琊榆数目减少,有濒于绝灭的危险,已被确定为国家二级保护植物。

目前，琅琊榆仅分布于滁州市琅琊山和江苏句容宝华山，且其种子发芽率低，繁殖较困难，林下幼苗更新不良, 因此,必须加大人工林的培育, 以确保其资源的可持续利用。

传统的增加琅琊榆幼苗的存活率，加快琅琊榆的培育速度方法是在育苗期施加一定化肥来促进其生长，这种方法在一定程度上促进了幼苗生长，但是步骤繁琐，需多次施用，且对土地，对环境造成一定潜在的损害，不利于可持续发展。

2. 国内外研究现状分析

国内外对AM真菌的培养方法、形态与分子鉴定，以及对单孢DNA、根样DNA和土样DNA的提取方法都有一定的研究。

并有了将Nested PCR与DGGE技术相结合,来用于AM真菌分子生态学的研究。

3. 研究的基本内容与计划

1、研究内容 1.1、am真菌的形态鉴定观察测定孢子形态特征，根据观察结果，参照 schenck perez （1990）的鉴定资料和 invam 网站（invam.caf.wvu.edu）信息，同时参阅有关鉴定材料和近几年发表的新种等进行种属的检索、鉴定。

1.2、am真菌的分子鉴定（1）am真菌单孢dna的提取依据van tuinen等（1998）描述的方法，稍加修改。

用移液枪吸取单个am真菌孢子，用无菌水漂洗数次后，置于无菌的1.5ml离心管中，加入40μl te缓冲液，将其充分破碎后，加入10μl 20% chelex-100。

4. 研究创新点

先对am真菌的形态进行鉴定，然后提取am真菌单孢dna、目标 dna 片段的 nested-pcr 扩增，第 1 次 pcr 采用引物对 its1-ndl22。

第 2 次 pcr 采用真核生物通用引物对lr1-ndl22，扩增序列覆盖核糖体 25s rdna 中 d1/d2 可变区域，扩增片段的大小约 750bp。

再进行测序，最后数据分析，得出结论。