鹅掌楸磷酸化蛋白质组图谱的建立开题报告

1. 研究目的与意义

胚性细胞的分化和发育是相应基因按顺序表达的结果，而基因在生物整体的功能最终由编码的蛋白质在细胞水平上体现，蛋白质作为基因表达的产物，通常可以作为某些发育过程的标记，通过对其进行全方面的研究有助于我们对体胚发生的机理，特别是在胚性培养物的诱导、体胚的发育和成熟过程中基因控制的机理的了解。

磷酸化是蛋白质翻译后修饰最为重要的形式，磷酸化在许多细胞过程中发挥关键作用，包括细胞周期调节，信号转导，细胞骨架调节，蛋白质代谢，转录和翻译、调节蛋白降解等过程中起着至关重要的作用

2. 国内外研究现状分析

由于磷酸化蛋白质含量很低，存在时间短，现有的技术对磷酸化蛋白质的位点无法做到精确定位，而且在制备样品的过程中极易发生脱磷酸化现象，使得难以对其进行分析和鉴定，因此通常需要对其进行富集操作，富集操作可以在磷酸化蛋白水平或在磷酸肽水平上进行。

目前主流的分离富集方法是色谱分离富集法、化学修饰法、亲和富集法和利用磷酸特异抗体进行免疫共沉淀富集法。

3. 研究的基本内容与计划

1.实验材料1.1 主要仪器与软件双向电泳仪、蛋白质图谱分析软件(imagemaster 2d platinum)1.2 主要材料与试剂杂交鹅掌楸未成熟胚、pro-q diamond染料、12.5%丙烯酰胺凝胶、胶条平衡缓冲液等2. 实验步骤2.1 利用杂交鹅掌楸未成熟胚诱导出胚性愈伤与非胚性愈伤组织。

2.2 从胚性愈伤组织与非胚性愈伤组织中提取蛋白质样本。

2.3 利用bradford 法测定两种愈伤组织样本的蛋白质浓度。

4. 研究创新点

双向电泳技术是目前蛋白质组研究中最常用的蛋白分离技术，具有高效、直观、高分辨率 、高灵敏度等优点。

它利用各种蛋白质具有不同的分子量、等电点来分离复杂蛋白质组。

通过2-de技术和相应的辅助技术如pro-q染色技术等来获取较高质量的蛋白质图谱，再根据磷酸化蛋白质在2-de图谱中的不同程度修饰的同一蛋白质以点串式沿水平方向展现或沿垂直方向呈现的这一规律，研究磷酸化信号分子特征与胚性能力获得、维持或丧失的关系。