1. 研究目的与意义
1.研究意义白粉病和赤霉病是小麦的主要病害,由于小麦基因组复杂,通过图位克隆的方法获得抗病基因非常困难,且遗传转化效率很低。
多种植物中的研究表明jrl基因家族在抗病反应中的具有重要作用。
本研究拟在前期对该基因的表达分析基础之后,对其中8个响应白粉菌和赤霉病的jrl基因,通过vigs的方法,快速分析其抗病性。
2. 研究内容和预期目标
(1)研究目标①了解植物凝集素的分类、特征、结构、功能以及其在各方面的基本应用。
②掌握基本的数据分析和文献查阅及文献分析的能力。
③学会基因克隆、rt-pcr等基本的分子生物学技术。
3. 研究的方法与步骤
本课题利用bsmv作为vigs载体,将特异性表达的tajrl的一段cdna插入bsmv载体的多克隆位点上,体外转录bsmv-vigs载体的3个部分,涂抹至小麦叶片,实施bsmv诱导的tajrl基因沉默,随后接种白粉病病菌、赤霉病病菌鉴定,以快速分析tajrl基因的抗病功能。
(3)实验方案Ⅰ est序列分析以jacalin结构域的蛋白序列为探针按40%的序列相似性通过tblastn检索小麦est数据库。
以95%的序列相似性为标准构建est重叠群。
4. 参考文献
特色或创新之处(1)vigs技术作为植物基因功能鉴定的一种反向遗传学新技术,与转基因、基因敲除、反义抑制等基因功能研究方法相比,不需要繁杂的突变体筛选及转基因植株的获取,操作简便,获得表型快,成本低廉。
同时,vigs具有高通量的优势,且能够应用于细胞基本功能或发育早期相关基因的功能鉴定。
因此,vigs技术一经诞生便得到了广泛的应用。
5. 计划与进度安排
2022年7月8月 查阅相关文献资料,熟悉实验室,并深入了解本项目的研究方法和操作技巧;确定课题方案,准备所需的实验仪器和材料2022年8月9月 完成项目所需的TaJRL基因片段的克隆2022年9月11月 完成BSMVVIGS载体的构建2022年11月2022年1月 完成TaJRL基因对白粉病、赤霉病抗性的鉴别2022年1月2月 整理和分析实验数据,撰写论文,并办理相关结题手续
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