应用蛋白质电泳技术检测杂交油菜种子的真实性和纯度开题报告

1. 研究目的与意义

本课题的意义：油菜是我国区域分布最广、播种面积最大的油料作物，在我国农业中占有重要地位。

随着杂交油菜的广泛种植和大量新杂交种的不断涌现，能够提高产量和改良品质的重要途径就是油菜杂种优势的利用,而杂交种能否发挥其杂种优势的关键在于种子纯度。

与此同时，随着杂交油菜种植面积的逐年扩大，种子纯度成为杂交油菜种子生产和质量管理中最突出的问题之一。

2. 研究内容和预期目标

研究的目标：1.明确油菜种子总蛋白、球蛋白、谷蛋白、醇溶蛋白和清蛋白在品种真实性和纯度中应用的可能性，以及它们之间多样性的差异。

2.在此基础上，构建多样性最好的那类蛋白应用在油菜不同品种之间真实性和纯度鉴定中的方法。

3.熟悉掌握种子真实性和纯度鉴定的实验过程和操作。

3. 研究的方法与步骤

研究方法：采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术（sds-page）对从种子中提取出的蛋白进行电泳检测，之后对其条带进行分析。

技术路线：1.聚丙烯酰胺凝胶电泳技术（sds-page）蛋白的提取及电泳样品的准备：（1）将每粒种子充分研磨成粉末，置于1.5 ml离心管中，加1ml蛋白提取液放于37℃摇床提取1h；（2）4 ℃，12000 rpm离心15 min，取上清；（3）取100μl相同浓度的样品按4:1比例加入样品缓冲液；（4）样品充分涡旋混匀并煮沸3～5 min待用。

2.sds-page电泳过程：（1）配置分离胶，加入过硫酸铵和temed后，轻轻搅拌使其混匀（过硫酸铵现配现用，操作时戴手套）；（2）小心将凝胶溶液加入模具中（凝胶溶液加至约距前玻璃板顶端1.5cm处）；（3）轻轻在分离胶缓冲液上均匀覆盖一层水饱和异戊醇，静置30 min，待分离胶凝固；（4）倒去分离胶上的异戊醇并用蒸馏水缓慢冲洗两遍，用滤纸吸干胶面上的残留水分，灌入配置好的浓缩胶，插入梳子，静置20 min至浓缩胶凝固；（5）小心拔出梳子，将缓冲液加入内外电泳槽中，用微量进样器赶走加样孔中的废胶和气泡；（6）将准备好的样品加入进样孔，接通电源，电泳条件开始设为恒压60v，待溴酚蓝带完全进入分离胶后，电压加倍；（7）当溴酚蓝带距玻璃板下沿1 cm处时结束电泳，取出凝胶并做好标记；（8）蒸馏水洗1～2次，室温摇床固定30min，弃去固定液，放入适量考马斯亮蓝r250或g250染色30 min~ 2 h（视具体染色情况而定），换上脱色液，摇动脱色至条带清晰条带；（9）将凝胶放入天根凝胶成像系统中拍照扫描。

4. 参考文献

1.试验材料有创新。

选用市场上销售量较大、品质优良且有代表性的油菜品种。

2.思路上有特色。

5. 计划与进度安排

研究计划： 1. 2022.72022.8 查文献，系统掌握相关知识,试验准备。

22022.82022.10 设计具体的实验方案，参加实验室相关实验操作。

3. 2022.102022.11 根据之前搜集的相关信息，选择购买有代表性的油菜种子。